การเพาะเลี้ยงแกรนูโลซ่าเซลล์จากถุงไข่สุกรแบบยาวนานให้พัฒนาเป็นเซลล์ไลน์เพื่องานวิจัยทางเซลล์เทคโนโลยีชีวภาพ

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ งานวิจัยนี้ศึกษาความเป็นไปได้ในในการเพาะเลี้ยงเซลล์ในรังไข่สุกรคือ granulosa cells ที่เก็บมาจากโรงฆ่าสัตว์ โดยเริ่มต้นเพาะเลี้ยงแบบ primary cell culture และเพาะเลี้ยงแบบยาวนานต่อไป เปรียบเทียบใน อาหาร 2 สูตรคือ M199 และ DMEM พบว่าเซลล์ที่เพาะเลี้ยงเริ่มต้นมีรูปร่างกลม ต่อมาเซลล์เริ่มมีการยึดยาวเกาะพื้นผิวของจานเพาะเลี้ยงเพิ่มขึ้นเมื่อเพาะเลี้ยงนาน 24 ชั่วโมง เซลล์ได้ยืดยาวแผ่ทั่วทั้งจานเพาะเลี้ยง 100 เปอร์เซ็นต์ เมื่อเพาะเลี้ยงนาน 1-2 สัปดาห์ เซลล์แผ่ยืดยาวมากขึ้นและสานตัวเป็นร่างแหเมื่อเพาะเลี้ยงนาน 12 สัปดาห์ การตรวจสอบการมีชีวิตของเซลล์ด้วยวิธี MTT assay พบว่าเซลล์ที่เพาะเลี้ยงนาน 2 สัปดาห์ เซลล์เจริญพัฒนาสูงที่สุด (908.700?0.03%) ผลของการเพาะเลี้ยงแกรนูโลซ่าเซลล์สุกรในอาหารสูตร M199 เปรียบเทียบกับอาหารสูตร DMEM โดยใช้เซลล์ใน passage ที่ 0-2 เมื่อเพาะเลี้ยงเริ่มต้นพบว่าเซลล์ที่เพาะเลี้ยงในอาหารทั้ง 2 สูตร มีลักษณะรูปร่างกลม ต่อมา พบว่าเซลล์มีรูปร่างหัวแหลมท้ายแหลมและยืดยาวออก เมื่อเพาะเลี้ยงนาน 24 ชั่วโมง เซลล์มีการเจริญพัฒนาแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) ผลของการนำแกรนูโลซ่าเซลล์ไปแช่แข็งและนำกลับมาเพาะเลี้ยงใหม่แบบระยะยาวในอาหารสูตร M199 พบว่ารูปร่างของเซลล์เริ่มต้นเหมือนกับเซลล์ที่เพาะเลี้ยงแบบปฐมภูมิ ประโยชน์ของงานวิจัยนี้คือสามารถเพาะเลี้ยงแกรนูล่าเซลล์สุกรที่เก็บมาจากโรงฆ่าสุกรที่เริ่มต้นจาก primary cell culture และเพาะเลี้ยงแบบระยะยาวได้ดีในอาหารสูตร DMEM ตลอดจนสามารถศึกษาทางลักษณะโครงสร้างการเปลี่ยนแปลงรูปร่างของเซลล์ในห้อง ปฏิบัติการและนำเซลล์มาใช้ในงานเทคโนโลยีชีวภาพได้ เช่นการเพาะเลี้ยงเซลล์ไลน์ นำเซลล์ไปทดสอบสารพิษได้ เป็นต้น ซึ่งช่วยประหยัดค่าใช้จ่าย ลดการใช้สัตว์ทดลองและยังถูกต้องตามหลักจริยธรรมอีกด้วย คำสำคัญ: Porcine granulosa cells, long term culture, MTT assay

คำสำคัญ

ระดับความพร้อมของโครงการ