ศึกษาสารหลั่งจากถุงไข่สุกรเพื่อส่งเสริมการเจริญพัฒนาของเซลล์ไข่และเซลล์บุผิวในจานเพาะเลี้ยง เพื่อช่วยทดแทนการใช้ฮอร์โมนและใช้เป็นส่วนผสมในผลิตภัณฑ์บำรุงผิว

บทคัดย่อ

ศึกษาสารหลั่งในถุงไข่สุกรพันธุ์ Large Write ขนาดกลาง (4-6 มิลลิเมตร) ที่ความเข้มข้นโปรตีน 200 และ 500 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ต่อการส่งเสริมการเจริญพัฒนาของเซลล์ไข่สุกรที่มีเซลล์ล้อมรอบจากถุงไข่ขนาดกลางที่เพาะเลี้ยงแบบปลอดเชื้อในอาหาร M199 ที่เสริมด้วยฮอร์โมน (FSH, LH และ estradiol), 10% โปรตีนซีรัมจากลูกวัว (fetal bovine serum: FBS), 2.2 mg/mL, NaHCO3, 0.25 mM pyruvate, 15 ?g/mL และ 50 ?g/mL และ gentamycin sulfate ในตู้อบที่มีความชื่นสูง 5% CO2 ในบรรยากาศ 95 เปอร์เซ็นต์ ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม 3 กลุ่มคือ (1. เซลล์ไข่เพาะเลี้ยงใน M199, 2. เซลล์ไข่เพาะเลี้ยงใน M199 เสริมด้วย FSH, LH and estradiol, 3. เซลล์ไขเพาะเลี้ยงใน M199 เสริมด้วย FSH, LH and estradiol and 10% fetal bovine serum: FBS) เพาะเลี้ยงนาน 24 และ 44 ชั่วโมง โดยวัดขนาดเซลล์ล้อมรอบเซลล์ไข่ที่มีการแผ่ขยายเมื่อไข่มีการเจริญพัฒนา พบว่าสารหลั่งจากถุงไข่ขนาดกลางที่ความเข้มข้นโปรตีน 200 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ไม่ส่งผลต่อการเจริญพัฒนาของเซลล์ไข่ที่มีเซลล์ล้อมรอบ ส่วนสารหลั่งจากถุงไข่ขนาดกลางที่ความเข้มข้นโปรตีน 500 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ส่งผลให้เซลล์ไข่มีร้อยละของการเจริญพัฒนาสูงที่สุดมากกว่ากลุ่มควบคุมเชิงบวก (เสริมด้วยฮอร์โมนและซีรัมลูกวัว) โดยเซลล์ล้อมรอบเซลล์ไข่ได้ขยายตัวยืดยาวออกแบบไฟโบบลาสมากกว่ากลุ่มควบคุมเชิงบวก สรุปได้ว่าสารหลั่งจากถุงไข่ขนาดกลางที่ความเข้มข้นโปรตีน 500 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เป็นความเข้มข้นที่เหมาะสมสำหรับใช้เสริมในอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์ไข่เพื่อช่วยส่งเสริมให้เซลล์ไข่เจริญพัฒนาได้ดีทดแทนการใช้ฮอร์โมนและโปรตีนซีรัมจากลูกวัว พร้อมกันนี้ได้ศึกษาผลของสารหลั่งจากถุงไข่สุกรขนาดเล็ก (เส้นผ่านศูนย์กลาง 1-3 มิลลิเมตร) ขนาดกลาง (เส้นผ่านศูนย์กลาง 4-6 มิลลิเมตร) และขนาดใหญ่ (เส้นผ่านศูนย์กลาง 7-8 มิลลิเมตร) ต่อการเจริญพัฒนาของเซลล์บุผิวท่อนำไข่สุกรที่เพาะเลี้ยงแบบปฐมภูมิ โดยเพาะเลี้ยงในอาหารสูตร M199 เสริมด้วยโปรตีนจากลูกวัว (FBS) 10 เปอร์เซ็นต์ ในตู้บ่มที่ความชื้นสูง 5 เปอร์เซ็นต์ เสริมคาร์บอนไดออกไซด์ ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 96 ชั่วโมง พบว่าเซลล์มีลักษณะแหลมหัวแหลมท้ายและมีการแผ่ขยายขนาดเพิ่มขึ้น 80-90 เปอร์เซ็นต์ เมื่อนำเซลล์ไปทดสอบกับสารหลั่งจากถุงไข่สุกรทั้ง 3 ขนาด ที่ความเข้มข้นโปรตีน 2, 4, 20, 40, 200, 400, 500 และ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (M199) และกลุ่มควบคุมเชิงบวก (M199 เสริม FBS) เพาะเลี้ยงนาน 24 ชั่วโมง จึงตรวจสอบเปอร์เซ็นต์การเจริญพัฒนาของเซลล์ด้วยวิธี MTT assay และวิเคราะห์ผลทางสถิติด้วย One-way ANOVA พบว่ากลุ่มที่ทดสอบด้วยสารหลั่งจากถุงไข่ขนาดเล็ก ที่ความเข้มข้นโปรตีน 40, 200, 400, 500 และ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร มีเปอร์เซ็นต์การเจริญพัฒนาของเซลล์ที่สูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05) และกลุ่มที่ทดสอบด้วยสารหลั่งในถุงไข่ขนาดกลาง ที่ความเข้มข้นโปรตีน 40, 200, 400, 500 และ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร มีเปอร์เซ็นต์การเจริญพัฒนาของเซลล์ที่สูงกว่ากลุ่มควบคุม อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) และพบว่าที่ความเข้มข้นโปรตีน 400, 500 และ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร มีเปอร์เซ็นต์การเจริญพัฒนาของเซลล์สูงกว่ากลุ่มควบคุมเชิงบวก อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) ส่วนกลุ่มที่ทดสอบด้วยสารหลั่งในถุงไข่ขนาดใหญ่ที่ความเข้มข้นโปรตีน 20, 40, 200, 400, 500 และ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร มีเปอร์เซ็นต์การเจริญพัฒนาของเซลล์ที่สูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05) และพบว่าที่ความเข้มข้นโปรตีน 500 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร มีเปอร์เซ็นต์การเจริญพัฒนาของเซลล์สูงกว่ากลุ่มควบคุมเชิงบวกอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) สรุปว่าสารหลั่งจากถุงไข่ขนาดกลางที่ความเข้มข้นโปรตีน 400, 500 และ 600 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตรและสารหลั่งจากถุงไข่ขนาดใหญ่ที่ความเข้มข้นโปรตีน 500 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เหมาะสมที่จะนำมาเสริมในอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์บุผิวท่อนำไข่สุกร ผลศึกษาครั้งนี้พบว่าสารหลั่งจากถุงไข่สุกรขนาดกลางและขนาดใหญ่สามารถส่งเสริมการเจริญพัฒนาของเซลล์ไข่และเซลล์บุผิวท่อนำไข่ได้ดี โดยสามารถช่วยทดแทนการใช้ฮอร์โมนและโปรตีนจากลูกวัวที่มีราคาแพง ผลงานวิจัยนี้สามารถประยุกต์ใช้ในงานเทคโนโลยีชีวภาพ ในการใช้สารหลั่งจากถุงไข่สุกรเพื่อการทดแทนการใช้ฮอร์โมนและใช้เป็นส่วนผสมในผลิตภัณฑ์บำรุงผิวต่อไป

คำสำคัญ