การผลิตอนุภาคคล้ายชิคุนกุนยาไวรัสในเซลล์เพื่อการพัฒนาเป็นวัคซีน

บทคัดย่อ

ไวรัสชิคุนกุนยาถูกจัดอยู่ในจีนัสอัลฟาไวรัสของแฟมิลี Togaviridae จีโนมมีขนาดประมาณ 11.7 กิโลเบส ประกอบไปด้วยโปรตีนโครงสร้าง (Structural Protein) 5 โปรตีน (Capsid (C) , Envelope (E), E3, E2, 6K และ E1) และโปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้าง (Non structural Protein) อีก 4 ชนิดโปรตีน อนุภาคคล้ายไวรัส (Viral like particle, VLP) นั้นประกอบด้วยโปรตีนโครงสร้างเท่านั้น โดยทำหน้าที่เป็นแอนติเจนที่สามารถกระตุ้น และทำปฎิกริยากับภูมิคุ้มกันได้ดี ในการศึกษาครั้งนี้ใช้ตัวอย่าง พลาสมาของผู้ป่วยจำนวน 555 ตัวอย่าง และทดสอบเบื้องต้นโดยวิธี RT-PCR หาลำดับสารพันธุกรรมของเชื้อไวรัสครอบคลุมทั้งหมด (Whole Genome Sequencing, WGS) โดยวิธี Next Genertion Sequencing (NGS) และเปรียบเทียบสายพันธุ์โดยใช้วิธี Mulitple Sequences Alignment ด้วยโปรแกรม Geneious ผลการทดลองพบว่าตัวอย่างจำนวน 7 ตัวอย่าง โดยในปีพ.ศ. 2562 (ค.ศ 2019) มี 5 ตัวอย่าง คือ 1) R19-079 2) R19-094 3) R19-142 4) 13-63-13420 5) 13-63-14477 และในปีพ.ศ. 2552 (ค.ศ 2009) มี 2 ตัวอย่าง คือ 6) 16856 และ 7) 32808 โดยสามารถหาลำดับเบส ทั้งหมดได้ 11680 เบส การเปรียบเทียบความแตกต่างของสายพันธุ์ชิคุนกุนยาไวรัสที่พบในประเทศไทย และต่างประเทศ เช่น มาเลเซีย อินโดนีเซีย ฟิลิปินส์ อินเดีย บังคลาเทศ และ บราซิล พบว่า สามารถแบ่งได้เป็น 3 กลุ่ม คือ 1.กลุ่มที่พบช่วงปี พ.ศ 2505-2538 2. กลุ่มระหว่างปีพ.ศ 2552-2553 และ 3. กลุ่มระหว่างปี พ.ศ 2559-2563 ซึ่งทั้ง 3 กลุ่มมีความแตกต่างกัน และ ไวรัสชิกุนคุนยาที่เป็นสายพันธุ์ไทย ระหว่างปี 2552 กับปี 2562 พบว่ามีกรดอะมิโน (aa) ของโปรตีนโครงสร้าง ในส่วน C, E1 และ E2 แตกต่างกัน คือส่วน C มี 1 ตำแหน่ง K72R ส่วน E2 มี 3 ตำแหน่ง คือ G530S, Q576K, และ V588A ส่วน E1 มี 1ตำแหน่ง K1018E สำหรับการผลิต อนุภาคคล้ายไวรัส ได้จากเชลล์เพาะเลี้ยง human embryonic kidney 293 T (HEK293T) ที่มี รีคอมบินแนนท์เวคเตอร์ (CHIK 2009 Thai Isolate; 16856 ) โปรตีน (VLP 2009) และ โปรตีน (VLP 2009)ที่ได้ ใช้เป็นแอนติเจน เคลือบเพลทเพื่อการทดสอบการวัดระดับของแอนติบอดีชนิด IgG โดยวิธี ELISA และ เปรียบเทียบกับ ชุดตรวจแอนติบอดี ab 177835, Anti-Chikunginya Virus IgG Human ELISA Kit) ให้ค่าที่สอดคล้องกัน ( R2 =0.9191) อย่างไรก็ตาม ยังคงต้องศึกษาการเปลี่ยนแปลงของสายพันธุ์ของไวรัสชิกุนกุนยาต่อไป คำสำคัญ: ไวรัสชิคุนกุนยา, อนุภาคคล้ายไวรัส, แอนติเจน, การหาลำดับเบส

คำสำคัญ

ระดับความพร้อมของโครงการ