การผลิตโมโนโคนัลแอนติบอดีชนิดรีคอมบิแนนท์ที่จำเพาะต่อโปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้างของไวรัสเอนเทอโร ๗๑ เพื่อใช้เป็น เครื่องมือทางชีวภาพในการศึกษาพยาธิกำเนิดของโรคมือเท้าปากชนิดรุนแรง

บทคัดย่อ

โปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้าง (Nonstructural protein) ชนิด 2B และ 3A ของไวรัสเอนเทอโร 71 (Enterovirus 71; EV71) มีบทบาทในการก่อโรคทั้งโดยการช่วยให้เกิดการ transcription และ translation ของสารพันธุกรรมไวรัสเพื่อผลิตอนุภาคไวรัสใหม่ ช่วยให้อนุภาคไวรัสใหม่แพร่ออกจากไปติดเชื้อเซลล์ข้างเคียง กดภูมิคุ้มกันจากการตอบสนองของเซลล์เจ้าบ้านเพื่อป้องกันการกำจัดเชื้อ รวมถึงการรบกวนสมดุลของเซลล์ (homeostasis) ซึ่งบทบาทเหล่านี้ของ nonstructural proteins ล้วนมีความเป็นไปได้ที่จะเป็นปัจจัยที่ส่งเสริมให้เกิดพยาธิสภาพของเซลล์ติดเชื้อ โครงการวิจัยนี้สามารถรผลิต recombinant nonstructural protein 2B (r2B) และ 3A (r3A) ของไวรัส EV71 ใน 293T HEK cell ซึ่งเป็น mammalian expression system โดยที่โปรตีน r2B และ r3A มี FLAG tag เชื่อมติดอยู่ที่ปลาย C-terminus ไว้สำหรับการติดตามด้วย ELISA หรือ Western blotting และกระบวนการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์โดยวิธี affinity chromatography เมื่อนำ purified r2B และ purified r3A ไปใช้คัดเลือก phages ที่ผิวมีการ display โมเลกุล ScFv antibody (ScFv-phage) จาก mouse ScFv phage antibody display library พบว่าไม่สามารถคัดเลือก ScFv-phage ที่จับจำเพาะกับ r2B แต่สามารถผลิต ScFv-phage ที่จับจำเพาะกับ r3A จำนวน 2 clones (ScFv-phage 3A#141 และ ScFv-phage 3A#164) ซึ่งทั้ง 2 clones สามารถจับกับ native viral protein ในเซลล์ติดเชื้อได้ด้วยวิธี ScFv-phage ELISA ดังนั้นจึงมีศักยภาพพัฒนาต่อยอดสำหรับตรวจหา EV71 nonstructural protein และศึกษาบทบาทของโปรตีนในเซลล์ประสาทต่อไปในอนาคต

คำสำคัญ