การศึกษาหาเชื้อแบคทีเรียกรดแลกติกจำเพาะ Lactobacillus reuteri KUB-AC5 ในลำไส้ไก่ และการตอบสนองของเชื้อแบคทีเรียกรดแลกติก ในการสร้างภูมิต้านทาน

บทคัดย่อ

Lactobacillus reuteri KUB-AC5 เป็นแบคทีเรียกรดแลกติกชนิด heterofrmentative ซึ่งแยกจากลำไส้ของไก่เนื้อ มีสมบัติความเป็นโปรไบโอติก โดยเฉพาะด้านความสามารถในการเจริญได้ที่ผนังลำไส้ และการผลิตสารยับยั้งคล้ายแบคเทอริโอซิน KAC5 ในการฆ่าเชื้อ Salmonella. การศึกษานี้มีเป้าหมาย เพื่อตรวจสอบและวิเคราะห์ปริมาณของเชื้อ Lb. reuteri ในสภาวะสิ่งแวดล้อมของลำไส้ โดยทำการออกแบบไพรเมอร์ และตัวติดตาม สำหรับวิธี TaqMan real time PCR assay จากบริเวณที่มีความแตกต่างของลำดับของนิวคลีโอไทด์ของเชื้อ 29 สปีชี่ที่พบโดยทั่วไปในลำไส้ไก่และเชื้อ Lb. reuteri KUB-AC5 บริเวณปลาย 5’ ของลำดับนิวคลีโอไทด์ตำแหน่ง 81-128 bp and 204-226 bp ประกอบด้วย forward primer (5’-TGC ACC TGA TTG ACG ATG GA-3’) , reverse primer (5’-CAA ACA AAA GCC ATG TGG CT-3’) and Taqman probe (5’-TAC CAG TGA GTG GCG GAC GG-3’) สภาวะที่เหมาะสมของปฏิกริยาพีซีอาร์คือ อุณหภูมิ annealing 60?C ความเข้มข้นของไพรเมอร์ และตัวติดตามเป็น 5 ?M ด้วยสภาวะดังกล่าวสามารถตรวจพบ Lb. reuteri ในลักษณะเชื้อเดี่ยว ที่ความเข้มข้นต่ำสุดเป็น 4.3 x 10 cells/reaction เมื่อทดสอบเชื้อ Lb. reuteri จากตัวอย่างลำไส้ไก่ 64 ตัวอย่าง พบว่าแนวโน้มความสามารถในการตรวจพบ Lb. reuteri โดยวิธี real time PCR และ PCR-DGGE ที่ความเข้มข้น 1.6 logCFU/g และ 2.8 logCFU/g ตามลำดับ ทำการศึกษาผลของเชื้อโปรไบโอติกจำนวน 12 สายพันธุ์ได้แก่ Lb. reuteri KUB-AC5, Lactobacillus fermentum KUB-C33, KUB-D18, KUB-D39, KUB-D73, KUB-J92; Lb. salivarius KUB-I48, KBB-I49, KUB-J61; KUB-D28 and Lactobacillus sp. KUB-C44, KUB-D26 ต่อการกระตุ้นภูมิคุ้มกันตของวัคซีน New Castle หลังจาก 2 สัปดาห์ และ ทุกสัปดาห์ เมื่อทำการคัดเลือกเชื้อและยืนยันผลการทดลองตามลำดับ ด้วยค่า Geometric mean antibody titres (GMT) ผลการทดลองพบว่าค่าไตเตอร์ของชุดทดลองโปรไบโอติก และชุดทดลองควบคุม แตกต่างกันอย่างไม่มีนัยสำคัญในทุกช่วงอายุของไก่เนื้อ สรุปให้เห็นว่าการเสริมโปรไบโอติก105 โคโลนีต่อกรัมอาหาร เป็นเวลา 7 วัน ไม่กระตุ้นระดับภูมิคุ้มกันที่จำเพาะต่อโรคนิวคาสเซิลในไก่เนื้อ อย่างไรก็ตามระดับภูมิคุ้มกันของชุดทดลองใช้เชื้อ Lb. reuteri KUB-AC5 มีแนวโน้มสูงกว่าชุดควบคุม และเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องในไก่อายุ 42 วัน Lactobacillus reuteri KUB-AC5 เป็นแบคทีเรียกรดแลกติกชนิด heterofrmentative ซึ่งแยกจากลำไส้ของไก่เนื้อ มีสมบัติความเป็นโปรไบโอติก โดยเฉพาะด้านความสามารถในการเจริญได้ที่ผนังลำไส้ และการผลิตสารยับยั้งคล้ายแบคเทอริโอซิน KAC5 ในการฆ่าเชื้อ Salmonella. การศึกษานี้มีเป้าหมาย เพื่อตรวจสอบและวิเคราะห์ปริมาณของเชื้อ Lb. reuteri ในสภาวะสิ่งแวดล้อมของลำไส้ โดยทำการออกแบบไพรเมอร์ และตัวติดตาม สำหรับวิธี TaqMan real time PCR assay จากบริเวณที่มีความแตกต่างของลำดับของนิวคลีโอไทด์ของเชื้อ 29 สปีชี่ที่พบโดยทั่วไปในลำไส้ไก่และเชื้อ Lb. reuteri KUB-AC5 บริเวณปลาย 5’ ของลำดับนิวคลีโอไทด์ตำแหน่ง 81-128 bp and 204-226 bp ประกอบด้วย forward primer (5’-TGC ACC TGA TTG ACG ATG GA-3’) , reverse primer (5’-CAA ACA AAA GCC ATG TGG CT-3’) and Taqman probe (5’-TAC CAG TGA GTG GCG GAC GG-3’) สภาวะที่เหมาะสมของปฏิกริยาพีซีอาร์คือ อุณหภูมิ annealing 60?C ความเข้มข้นของไพรเมอร์ และตัวติดตามเป็น 5 ?M ด้วยสภาวะดังกล่าวสามารถตรวจพบ Lb. reuteri ในลักษณะเชื้อเดี่ยว ที่ความเข้มข้นต่ำสุดเป็น 4.3 x 10 cells/reaction เมื่อทดสอบเชื้อ Lb. reuteri จากตัวอย่างลำไส้ไก่ 64 ตัวอย่าง พบว่าแนวโน้มความสามารถในการตรวจพบ Lb. reuteri โดยวิธี real time PCR และ PCR-DGGE ที่ความเข้มข้น 1.6 logCFU/g และ 2.8 logCFU/g ตามลำดับ ทำการศึกษาผลของเชื้อโปรไบโอติกจำนวน 12 สายพันธุ์ได้แก่ Lb. reuteri KUB-AC5, Lactobacillus fermentum KUB-C33, KUB-D18, KUB-D39, KUB-D73, KUB-J92; Lb. salivarius KUB-I48, KBB-I49, KUB-J61; KUB-D28 and Lactobacillus sp. KUB-C44, KUB-D26 ต่อการกระตุ้นภูมิคุ้มกันตของวัคซีน New Castle หลังจาก 2 สัปดาห์ และ ทุกสัปดาห์ เมื่อทำการคัดเลือกเชื้อและยืนยันผลการทดลองตามลำดับ ด้วยค่า Geometric mean antibody titres (GMT) ผลการทดลองพบว่าค่าไตเตอร์ของชุดทดลองโปรไบโอติก และชุดทดลองควบคุม แตกต่างกันอย่างไม่มีนัยสำคัญในทุกช่วงอายุของไก่เนื้อ สรุปให้เห็นว่าการเสริมโปรไบโอติก105 โคโลนีต่อกรัมอาหาร เป็นเวลา 7 วัน ไม่กระตุ้นระดับภูมิคุ้มกันที่จำเพาะต่อโรคนิวคาสเซิลในไก่เนื้อ อย่างไรก็ตามระดับภูมิคุ้มกันของชุดทดลองใช้เชื้อ Lb. reuteri KUB-AC5 มีแนวโน้มสูงกว่าชุดควบคุม และเพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องในไก่อายุ 42 วัน

คำสำคัญ