การผลิตและศึกษาคุณสมบัติของโปรตีนรีคอมบิแนนท์แลคเคส จากเชื้อกลุ่มอซีเนโตแบคเตอร์

บทคัดย่อ

แลคเคส (benzenediol: oxygen oxidoreductase; EC 1.10.32) เป็นเอนไซม์ที่อยู่ในกลุ่ม multi-copper oxidases (MCOs) และนิยมใช้ในงานอุตสาหกรรมหลายชนิดเช่น อุตสาหกรรมกระตาษ การแปรรูปไม้ และ อุตสาหกรรมสิ่งทอ เนื่องจากคุณสมบัติของเอ็นไชม์ที่สามารถย่อย substrate ได้หลายชนิด ทั้งกลุ่ม phenolic and non-phenolic compounds การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษารูปแบบ multi-copper oxidoreductases หรือ laccase ในเชื้อ Acinetobacter spp. ที่แยกจากสิ่งแวดล้อมคัดเลือกสายพันธ์ Acinetobacter ที่สร้าง เอ็นไซม์แลคเคสสูงสุดไปเป็นยืนต้นแบบในการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ แลคเคส โดยเชื้อ Acinetobacter spp. จะถูกแยกโดยใช้อาหาร Leeds Acinetobacter Medium (LAM) และทตสอบด้วย biochemical test ผลการวิจัยสามารถแยกเชื้อ ได้ 68 ไอโซเลท เป็นเชื้อจากน้ำ 38 (55.88%) ไอโซเลท จากติน 30 (44.12%) ไอโช เลท ทุกไอโชเลทสามารถสร้างแลคเศส จากการทดสอบในอาหาร nutrient agar plate ที่มี 0.0296 guaiacol เมื่อ ยืนยันเชื้อโตยใช้ PCR และวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทต์ของ 165 7RNA and rpoB genes สามารถแยก Acinetobacter spp. ได้ 17 ไอโชเลทมี 7 ไอโซเลทตรวจพบยืน pcaA , laccase และ copA genes ทั้งสามยือ เชื้อ NI-65 ที่ถูกวินิจฉัยว่าเป็น A. boumonni และตรวจพบมียืนแลดเคสทั้งสามยืน NI-65 นำมาใช้เป็นเชื้อต้นแบบ ในการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ แลคเคส โดยพบว่าเชื้อสามารถผลิต extracellular laccase โดยมีกิจกรรมของ เอ็นไซม์ เท่ากับ 0.07 U/ml เมื่อใช้ 2,6-dimethoxphenol (OMP) เป็น substrate ในขณะที่มี 2 mM CuSO4.

คำสำคัญ