การโคลนยีนและวิเคราะห์เอนไซม์ย่อยลิกโนเซลลูโลสชนิดใหม่จากแอคติโนมัยสีทเอนโดไฟต์

บทคัดย่อ

จากการตรวจสอบความสามารถในการย่อยลิกโนเซลลูโลสของแอคติโนมัยสีทเอนโดไฟต์จำนวน 308 สายพันธุ์ พบว่า 70 สายพันธุ์ย่อย AZCL-xylan 8 สายพันธุ์ย่อย AZCL-CMC และ 25 สายพันธุ์ย่อย AZCL-?-glucan เมื่อทดสอบการย่อยภายใต้สภาวะรุนแรง พบว่ามี17 สายพันธุ์ ย่อยบีตา-กลูแคนได้ที่ pH 4.0, 45 องศาเซลเซียส และ 9 สายพันธุ์ ย่อยได้ที่ pH 4.0, 60 องศาเซลเซียส จากนั้นออกแบบคู่ไพรเมอร์และเพิ่มปริมาณยีนกลุ่ม GH11,GH5, GH6, GH9 และ GH16 ด้วยวิธี PCR เมื่อวิเคราะห์ลำดับเบสและกรดอะมิโนของยีนที่มีแตกต่างจากฐานข้อมูล จึงเลือกสายพันธุ์ GMKU 303 และ GKU 526 ซึ่งย่อยบีตา-กลูแคน ได้ที่สภาะรุนแรงคือ pH 4.0, 45?C และ pH 4.0, 60?C ตามลำดับ มาจำแนกชนิดของเชื้อด้วยการหาลำดับเบสของยีน 16S rRNA พบว่าอยู่ในสกุล Promicromonospora และ Streptomyces ตามลำดับ จึงโคลนยีนบีตา-กลูคาเนสจากเชื้อทั้งสองด้วยเทคนิค gene walking ได้ยีน GH5_GLN จาก Promicromonospora sp. GMKU 303 ขนาด 700 คู่เบส และยีน GH16_GLN จาก Streptomyces sp. GKU 526 ขนาด 756 คู่เบส หลังจากนั้นได้ทำ gene walking อีกหลายการทดลอง แต่ไม่สามารถหาโคลนยีนได้เต็มยีน จึงไม่สามารถได้ยีนที่สมบูรณ์มาทำการทดลองต่อไปได้ จึงได้ยุติการรับทุนวิจัยสำหรับโครงการนี้

คำสำคัญ