การศึกษาโปรโมเตอร์และการจำแนกทรานสคริปชันแฟคเตอร์ของพืชภายใต้สภาวะเครียดเกลือ

บทคัดย่อ

ในสภาวะเครียดพืชจะผลิตสารในกลุ่ม ROS มากกว่าปกติซึ่งเป็นพิษต่อเซลล์ งานวิจัยก่อนหน้าพบว่าโปรตีนแคแตเลสถูกสังเคราะห์ขึ้นในสาหร่ายทนเค็ม เอนไซม์แคแตเลสมีบทบาทในการกำจัดไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ซึ่งเป็น ROS ชนิดหนึ่ง ดังนั้นโปรโมเตอร์ของยีนแคแตเลสจึงเป็นที่น่าสนใจ โดยในจีโนม C. reinhardtii พบว่ามียีนแคแตเลส 2 ยีน จากการวิเคราะห์การแสดงออกของยีน 2 ยีนนี้ในสาหร่ายไม่ทนเค็มและในสาหร่ายทนเค็มพบว่าการแสดงออกของยีน CAT1 ในสาหร่ายไม่ทนเค็มและสาหร่ายทนเค็มมีระดับการแสดงออกไม่แตกต่างกัน ในขณะที่พบการแสดงออกของยีน CAT2 เพิ่มสูงขึ้นในสาหร่ายทนเค็ม เมื่อทำการวิเคราะห์โปรโมเตอร์ของยีนแคแตเลส โดยทำการโคลนส่วนโปรโมเตอร์ของยีน CAT1 ความยาว 638 เบส 543 คู่เบสและ 425 คู่เบส โปรโมเตอร์ของยีน CAT2 ความยาว 473 คู่เบส 370 คู่เบส 283 คู่เบส และ 181 คู่เบส เข้าสู่ expression vector ที่มียีนลูซิเฟอเรส (LUC) เป็นยีนรายงานผล จากนั้นทำการส่งถ่ายพลาสมิดเข้าสู่สาหร่ายและนำไปวิเคราะห์จำนวนสำเนาของพลาสมิดที่เข้าไปในสาหร่ายเพื่อคัดเลือกสาหร่ายที่ได้รับการถ่ายยีนที่มีจำนวนสำเนาที่ใกล้เคียงกันให้มากที่สุดคือประมาณ 1-2 สำเนาเป็นการยืนยันผลว่าการแสดงออกของยีน LUC นั้นขึ้นอยู่กับการควบคุมของโปรโมเตอร์ที่ศึกษา หลังจากนั้นทำการศึกษาโปรโมเตอร์โดยดูการแสดงออกของยีน LUC พบการแสดงออกของยีน LUC ลดลง ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ CAT1 construct 425 คู่เบส เมื่อเทียบกับการแสดงออกของยีนลูซิเฟอเรสภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ CAT1 construct 638 คู่เบสและ 543 คู่เบส จากการวิเคราะห์ด้วยชีวสารสนเทศพบบริเวณ ehhancer ในบริเวณระหว่าง -543 คู่เบส และ -425 คู่เบสนับตั้งแต่ ATG ขึ้นไปของโปรโมเตอร์ CAT1 นั้นถูกตัดไป ในขณะที่จากการศึกษา CAT2 โปรโมเตอร์ ไม่พบการแสดงออกของยีน LUC ในสาหร่ายที่ได้รับการถ่ายพลาสมิดไม่พบการแสดงออกของยีนลูซิเฟอเรสในสาหร่ายที่มี construct ทุก construct

คำสำคัญ