การผลิตสารภูมิต้านทานแบบมอโนโคลนอลต่อมิตรากัยนีน
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
มิตรากัยนีนเป็นสารกลุ่มอินโดลแอลคาลอยด์ แยกได้จากใบกระท่อมโดยการหมักในเมธานอลที่ทำให้เป็นด่างด้วยแอมโมเนียม ไฮดรอกไซด์ จากนั้นสกัดด้วยวิธีกรด-ด่าง และแยกสารด้วยวิธีคอลัมน์โครมาโตกราฟีตามลำดับ ในระหว่างการแยกมิตรากัยนีน สามารถแยกสารแอลคาลอยด์อีกสองชนิดคือ paynantheine และ speciogynine ในการเตรียมสารกระตุ้นภูมิต้านทาน มิตรากัยนีนถูกออกแบบให้เชื่อมต่อกับโปรตีนตัวพา ได้แก่ bovine serum albumin (BSA), ovalbumin (OVA) และ keyhole limpet hemocyanin (KLH) โดยใช้ 3 วิธี คือ ใช้สาร 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) เดี่ยวๆ, ใช้ EDC ร่วมกับสาร N-hydroxysuccimide (EDC/NHS) และใช้ glutaraldehyde (GA) มิตรากัยนีนถูกเปลี่ยนหมู่ฟังก์ชั่นให้กลายเป็น carboxylic acid โดยวิธีการไฮโดรไลซิสด้วยด่าง จะได้สารอนุพันธ์ที่เป็นกรด (MGA) ก่อนที่จะถูกเชื่อมต่อกับโปรตีนด้วยวิธี EDC หรือ EDC/NHS คอนจูเกต MGA-BSA-1 ถูกเตรียมด้วยวิธี EDC ส่วนวิธี EDC/NHS จะถูกใช้เพื่อเตรียมคอนจูเกต MGA-BSA-2, MGA-OVA และ MGA-KLH นอกจากนี้ ไนโตรเจนบนวงแหวนอินโดลจะถูกเชื่อมต่อกับหมู่เอมีนใน BSA และ OVA โดยใช้ GA เป็นตัวเชื่อม จะได้คอนจูเกตสองชนิดคือ MG-GA-BSA และ MG-GA-OVA ตามลำดับ คอนจูเกตที่ได้จะนำมาผลิตสารภูมิต้านทานแบบโพลีโคลนอล และมอนอโคลนอล สารภูมิต้านทานแบบโพลีโคลนอลที่ได้จากการฉีดกระตุ้นด้วย MGA-BSA-1 และ MGA-BSA-2 ไม่มีคุณสมบัติในการจดจำสารมิตรากัยนีน คอนจูเกตทุกชนิด ยกเว้น MGA-BSA-1 และ MG-GA-OVA ถูกนำไปฉีดกระตุ้นในหนูเม้าส์สายพันธุ์ BALB/c เพื่อเตรียมสารภูมิต้านทานแบบมอนอโคลนอล พบว่ามีเพียงคอนจูเกต MGA-BSA-2 และ MG-GA-BSA ที่สามารถกระตุ้นการสร้างแอนติบอดี้ในหนูเม้าส์ได้ดี จากนั้นจึงแยกเอาม้ามหนูที่ได้รับการฉีดกระตุ้นด้วยคอนจูเกตสองชนิดนี้ไปใช้ในการเตรียมสารภูมิต้านทานแบบมอนอโคลนอลต่อไปเซลล์ไฮบริโดมาที่สามารถหลั่งสารภูมิต้านทานต่อมิตรากัยนีน ชื่อ 1A6 ได้จากการหลอมรวมเซลล์ม้ามหนูที่ถูกกระตุ้นด้วย MGA-BSA-2 เข้ากับเซลล์มะเร็ง myeloma ชนิด SP2/0 ด้วยกระแสไฟฟ้า (electrofusion) สารภูมิต้านทานแบบมอนอโคลนอลต่อมิตรากัยนีน (anti-MG MAb) แสดงปฏิกิริยาข้ามกลุ่มต่อสาร speciogynine (30.54%), paynantheine (24.83%) และ mitraciliatine (8.63%) การประยุกต์ใช้ในการหาปริมาณมิตรากัยนีนด้วยวิธีอีไลซ่า สามารถวัดได้ในช่วงความเข้มข้นระหว่าง 32.9-250.0 ?g/mL โดยมีความเที่ยงตรงชนิด intra-plate อยู่ในช่วง 2.43-3.53% และ ชนิด inter-plate 1.76-5.37% และมีค่าความถูกต้อง 94.88-107.20% และจากการหาปริมาณมิตรากัยนีนในตัวอย่างใบพืชกระท่อมด้วยวิธีอีไลซ่าพบว่า ได้ค่าใกล้เคียงกับการหาปริมาณด้วยวิธี HPLC โดยมีค่าสหสัมพันธ์เท่ากับ 0.9938 สารภูมิต้านทานที่ได้จากการศึกษานี้สามารถนำมาประยุกต์ใช้ในการวิเคราะห์ปริมาณแอลคาลอยด์จากกระท่อม กับตัวอย่างจำนวนมาก และรวดเร็ว