โครงสร้างและหน้าที่ของโดเมนจับไคตินของแฟมิลี 18 ไคติเนสจากเชื้อแบคทีเรีย vibrio harveyi
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
ในการศึกษาครั้งนี้ผู้วิจัยทำการศึกษาหน้าที่ของโดเมนจับไคตินที่ปลายเอ็นของเอ็นไซม์ไคติเนส เอ ของเชื้อ แบคทีเรีย Vibrio harveyi โดยทำการโคลนชิ้นส่วนของยีน ChBD ขนาด 372 bp ที่ถอดรหัสให้โดเมนจับไคติน เรียกว่า ChBDVhChiA ที่มีจำนวนกรดอะมิโน 124 ตัว เข้าไปในพลาสมิด pETBlue-1 ได้เป็นผลสำเร็จ หลังจากนั้นนำรี คอมบิแนนท์พลาสมิด pETBlue-1/ChBDVhChiA เข้าสู่แบคทีเรียเจ้าบ้านคือ E. coli สายพันธุ์ BL21Turner (DE3)pLacI พบว่าเซลล์ E. coli สามารถผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนได้ปริมาณมาก หลังจากทำบริสุทธิ์โปรตีนด้วยวิธี ทางโครมาโตกราฟฟีสองขั้นตอนคือ Ni-NTA affinity chromatography ตามด้วย gel filtration chromatography ได้โปรตีนที่บริสุทธิ์ประมาณ 10 mg ต่อเชื้อแบคทีเรีย 1 ลิตร ผลการวิเคราะห์โครงสร้างด้วยเทคนิค CD spectroscopy และ FL spectroscopy พบว่า ChBDVhChiA มีโครงสร้างทุติยภูมิหลักเป็น ?-rich ซึ่งสอดคล้องกับ โครงสร้างสามมิติที่ได้รายงานไว้แล้วและ ChBDVhChiA มีโครงรูปที่เหมาะสม การศึกษาคุณสมบัติการจับกับไคตินและ ไคโตซานด้วยเทคนิค polysaccharide binding assay พบว่าเอ็นไซม์ VhChiA และ ChBDVhChiA สามารถจับกับไค ตินได้ทุกชนิดแต่ด้วยความสามารถในการจับที่ไม่เท่ากัน โดยเอ็นไซม์ทั้งโมเลกุลสามารถจับกับไคตินได้สูงกว่าโดเมน จับไคตินประมาณ 10 เท่า การที่ ChBDVhChiA จับกับไคโตซานได้น้อยมากแสดงให้เห็นว่าหมู่ฟังก์ชัน N-acetamido ที่ ตำแหน่ง C2 ของวงแหวนน้ำตาล GlcNAc มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อสัมพรรคภาคการจับ การวิเคราะห์ค่าคงที่การแตก ตัวของการจับ (Kd) แสดงสัมพรรคภาพของการจับของ ChBDVhChiA จากมากไปน้อยดังนี้ colloidal ? chitin > colloidal ? chitin > crystalline ? chitin > crystalline ? chitin >> chitosan นอกจากนี้ผลการวิเคราะห์ ด้วย 1H-15N HSQC NMR spectroscopy แสดงให้เห็นว่า ChBDVhChiA ไม่มีสัมพรรคภาคต่อน้ำตาลสายสั้น โดย สรุปงานวิจัยครั้งนี้ได้ค้นพบว่า ChBDVhChiA มีหน้าที่จับกับไคตินสายยาวและหมู่ฟังก์ชัน C2-N-acetamido บนหน่วย น้ำตาล GlcNAc เป็นตัวกำหนดสัมพรรคภาพในการจับของ ChBDVhChiA กับสายไคติน