การระบุและศึกษาลักษณะสมบัติของฟิโคลินในกุ้งกุลาดำ

บทคัดย่อ

ฟิโคลินเป็นโปรตีนที่สามารถจับกับคาร์โบไฮเดรตบนผิวเซลล์ได้ โปรตีนนี้จึงมีบทบาทสำคัญในการจดจำและกำจัดเชื้อโรคในภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติของสิ่งมีชีวิต ในการศึกษานี้ได้มีการระบุและแยกลักษณะยีนฟิโคลินจากกุ้งกุลาดำ Penaeus monodon ซึ่งมี ORF 918 bp ถอดรหัสกรดอะมิโน 306 ตัว เมื่อตรวจสอบการแสดงออกของยีนในในลำไส้ ด้วยเทคนิค quantitative Real Time-PCR พบว่าเมื่อฉีดกุ้งด้วยเชื้อแบคทีเรีย V. harveyi การแสดงออกของยีนสูงขึ้นหลังจากฉีดเชื้อและมีการแสดงออกสูงที่สุดที่เวลา 24 ชั่วโมง ในขณะที่เมื่อกุ้งฉีดด้วยเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ยีนฟิโคลินมีการแสดงออกสูงที่สุดที่ 6 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อ เมื่อผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ (rPmficolin) ที่อยู่ในพลาสมิด pET43-ficolin สามารถผลิตโปรตีนในรูปที่ละลายได้ แต่ไม่สามารถทำบริสุทธิ์โปรตีน และเมื่อศึกษาสมบัติพบว่าโปรตีนที่ผลิตได้สามารถการจับกับผิวของแบคทีเรียชนิดต่าง ๆ ได้ ซึ่งการจับนี้อาศัยแคลเซียมในการทำงานด้วย นอกจากนี้โปรตีนรีคอมบิแนนท์ยังสามารถตกตะกอนแบคทีเรีย E. coli (G -), B. megaterium และ S. aureus (G +) และยีสต์ P. pastoris Y11430 ได้ แต่ไม่พบการการตกตะกอนของ V. harveyi และ V. parahaemolyticus (G -), S. haemolyticus (G +) และยีสต์ S. cerevisiae นอกจากนี้ น้ำตาลทุกตัวที่ใช้ในการทดลองไม่สามารถยับยั้งการตกตะกอนของแบคทีเรีย E. coli ได้ ผลจากการศึกษาครั้งนี้สามารถให้ความรู้พื้นฐานเกี่ยวกับฟิโคลินที่อาจเป็นประโยชน์ในการทำความเข้าใจเกี่ยวกับภูมิคุ้มกันที่เกิดจากกุ้งได้

คำสำคัญ