การศึกษาการเลือกผ่านของช่องไคโตพอรินจากแบคทีเรียก่อโรคอหิวาต์

บทคัดย่อ

ในการศึกษานี้ทำการตรวจหายืน porB จากเชื้อ V. cholerae ยีนนี้สร้างพอริน VcChiP ที่มีคุณสมบัติเป็นช่องจำเพาะต่อน้ำตาลไคโตโอลิโกแขคคาร์ เมื่อทำการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนที่ผลิตใน E. coli สายพันธุ์ที่ทำพันธุวิศวกรรม E. coli BL21 (Omp8) strain ให้ไม่สามารถสร้างพอรินหลักต่าง ๆ ได้ มีน้ำหนักโมเลกุลของหน่วยย่อยเท่ากับ 38 kDa ผลการทำ modelling พบว่ากรดดอะมิโนที่น่าจะเกี่ยวข้องโดยตรงกับการนำอิออนและการนำาน้ำตาลได้แก่ Trp118 และ Loop L3ผลการทดสอบด้วยเทคนิค BLM พบว่าโปรตีน VcChiP มีความสามารถในการสร้างช่องเดี่ยวในฟอตโฟลิปิดเมมเบรนที่นำอิออนได้โดยช่อง VcChiP มีลักษณะไม่สเถียรและไม่สมมาตร โดยการเปิด-ปิดของช่องขึ้นอยู่กับค่าความต่างศักย์ไฟฟ้าที่ให้และขั้วของศักย์ไฟฟ้า โดยพบว่าช่องโปรตีนจะตอบสนองต่อการนำอิออนได้ดีที่ศักย์ไฟฟ้าที่เป็นลบ ผลการทดสอบด้วยเทคนิค liposome swelling assay พบว่าน้ำตาลโมเลกุลเดี่ยวทั้งหมดที่ทำการทุดสอบสามารถแพร่ผ่านของ VcChiP ส่วนน้ำตาล D-meleziotse และ maltohexaose ไม่สามารถแพร่ผ่านได้ส่วนอัตราการแพร่ผ่านจะของน้ำตาลไคโอลิโอลิโกแชคคาร์ไรด์จะสูงขึ้นเมื่อสายของน้ำตาลยาวขึ้น ซึ่งบ่งบอกว่า VoChiP มีคุณสมบัติเป็นของช่องจำเพาะต่อน้ำตาลโคโคโอลิโภแชคคาร์ไรด์

คำสำคัญ