การประเมินวิธีการตรวจหากลุ่มยีนดื้อยาในเชื้อจุลชีพที่แยกได้จากผู้ป่วยติดเชื้อในกระแสเลือดและการกลายพันธ์ของยีน

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ ในปัจจุบันเชื้อ P. aeruginosa เป็นหนึ่งในกลุ่มเชื้อดื้อยาหลายขนานและสร้างปัญหาทางสาธารณสุขไปทั่วโลก โดยปั๊มขับยาปฏิชีวนะเป็นหนึ่งในกลไกสำคัญที่ทำให้เชื้อดื้อยาหลายขนานได้ ในการศึกษานี้ใช้หลักการใหม่คือ multiplex digital PCR ซึ่งจำเป็นต้องทดสอบหาสภาวะที่เหมาะสมเพื่อศึกษายีนที่เกี่ยวข้องกับกลไกปั๊มขับยาปฏิชีวนะของเชื้อ P. aeruginosa โดยทำการสกัด gDNA ของเชื้อสายพันธุ์มาตรฐาน ใช้ primer และ probe ที่จำเพาะต่อยีน mexB, mexD และ mexY เพื่อศึกษาหาอุณหภูมิที่เหมาะสมเบื้องต้น ด้วยวิธี multiplex real time PCR พบว่าอุณหภูมิที่เหมาะสมคือ 59.2 ?C จึงนำอุณหภูมิที่ได้ไปทดสอบต่อในวิธี multiplex digital PCR เพื่อหาความเข้มข้นของ gDNA ที่วิธีนี้สามารถตรวจวัดได้ พบว่าวิธี multiplex digital PCR สามารถตรวจวัดความเข้มข้นของ gDNA ได้อย่างน้อย 0.5 ng/?L ทั้งนี้เมื่อทดสอบกับ gDNA ของเชื้ออื่นที่ไม่ใช่ P. aeruginosa พบว่าให้ผลลบทั้งหมดแสดงถึงความจำเพาะของวิธี multiplex digital PCR งานวิจัยนี้จึงสรุปได้ว่าอุณหภูมิ59.2 ?C สำหรับปฏิกิริยาและการใช้ gDNA ที่ความเข้มข้น 0.5 ng/?L สามารถตรวจหากลุ่มยีนดื้อยาในกลไกปั๊มขับยาปฏิชีวนะของเชื้อ P. aeruginosa ด้วยวิธี multiplex digital PCR ได้อย่างจำเพาะคำสำคัญ : ยีน mexB, ยีน mexD, ยีน mexY, เชื้อ Pseudomonas aeruginosa, ปั๊มขับยาปฏิชีวนะ, ปฏิกิริยา multiplex digital PCR

คำสำคัญ

ระดับความพร้อมของโครงการ