การผลิตไฟโคไซยานินทนร้อนด้วยวิธีการโคลนและการแสดงออกแบบเฮเทอโรโลกัสในสาหร่ายสไปรูลินา (Arthrospira platensis)

บทคัดย่อ

ไฟโคไซยานินเป็นส่วนหนึ่งของไฟโคบิลิโปรตีน ซึ่งเป็นรงควัตถุสีน้ำเงินในกระบวนสังเคราะห์แสงของไซยาโนแบคทีเรีย สาหร่ายสีแดง และคริปโตโมแนสบางชนิด วัตถุประสงค์ของงานวิจัยคือต้องการหายีนไฟโคไซยานินทนร้อนจากไซยาโนแบคทีเรียน้ำพุร้อน ยีนที่ได้จะถูกใช้โคลนและแสดงออกใน Arthrospira (Spirulina) platensis เพื่อผลิตไฟโคไซยานินทนร้อนต่อไป จากการคัดกรองไซยาโนแบคทีเรียจากน้ำพุร้อน พบไซยาโนแบคทีเรียที่ผลิตไฟโคไซยานินทนร้อน คือ Phormidium sp. และ Synechococcus sp. จากนั้นสกัดไฟโคไซยานินทนร้อนด้วยวิธีการ วิธีฟริซ-ทอว์ และ โซนิเคชัน ทำไฟโคไซยานินให้บริสุทธิ์และตรวจหาลำดับกรดอะมิโนส่วนปลาย N นำลำดับกรดอะมิโนส่วนปลาย N ที่ได้มาถอดเป็นลำดับนิวคลีโอไทด์เพื่อใช้ออกแบบไพรเมอร์ในการเพิ่มจำนวนชิ้นส่วนยีนไฟโคไซยานิน ยีนไฟโคไซยานินถูกเพิ่มจำนวนด้วยเทคนิค asymmetric PCR จนได้ยีนครบทั้งยีน ออกแบบและสังเคราะห์ชิ้นส่วน transposon ที่ใช้ผลิตไฟโคไซยานินพร้อมทั้งทดสอบการแสดงออกของชิ้นส่วนที่ทำการสังเคราะห์ พบว่าชิ้นส่วนที่ได้สามารถแสดงออกโปรตีนได้สำเร็จใน E. coli สุดท้ายทดสอบการแสดงออกแบบเฮเทอโรโลกัสของยีนไฟโคไซยานินทนร้อนในไซยาโนแบคทีเรีย Arthrospira platensis โดยการถ่ายโอนชิ้นส่วนของ transposon เข้าสู่ Arthrospira platensis ด้วยวิธี electroporation ทำการคัดกรองหาเซลล์ที่ได้รับการถ่ายโอนยีนโดยการเพาะเลี้ยงในอาหารที่มียาปฏิชีวนะคลอแรมเฟนิคอลความเข้มข้น 2 ?g/ml ใน microwell electrostatic chip เป็นเวลา 2 สัปดาห์จากนั้นนำมาเลี้ยงต่อใน 96 well cell culture plate ด้วยอาหารที่ไม่มียาปฏิชีวนะ จากผลการทดลองพบการถ่ายโอนยีนไฟโคไซยานินทนร้อนในสาหร่ายสไปรูลินา (Arthrospira platensis) ได้สำเร็จ และศึกษาด้านคุณสมบัติการทนร้อนของไฟโคไซยานินทนร้อนที่แสดงออกนี้ต่อไป

คำสำคัญ