การวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่งโดยเทคนิควิธีการระดับโมเลกุล
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
วัตถุประสงค์ของการวิจัยนี้ ก็เพื่อพัฒนาวิธีการตรวจสอบไวรัสสำคัญที่มีการติดเชื้อในมัน ฝรั่ง โดยอาศัยเทคนิควิธีการของ reverse transcription (RT) polymerase chain reaction (PCR) ซึ่งโครงการวิจัยฯ ประสบผลสำเร็จในการพัฒนาการตรวจสอบ Potato virus A (PVA), Potato virus X (PVX), Potato virus Y (PVY) และ Potato leafroll virus (PLRV) โดยอาศัย เทคนิควิธีการระดับโมเลกุลของ RT-PCR โครงการวิจัยฯ ได้ทำการเก็บรวบรวมตัวอย่างใบของมันฝรั่งที่แสดงลักษณะอาการที่คาด ว่ามีการติดเชื้อไวรัสได้จำนวน 1,120 ตัวอย่าง จากแปลงเพาะปลูกของเกษตรกรในจังหวัด เชียงใหม่ เชียงราย และตาก ซึ่งเป็นจังหวัดในภาคเหนือ และจากโรงเรือนเพาะปลูกพืชทดลองของ โครงการ ในช่วงเวลาตั้งแต่เดือนธันวาคม 2550 ถึงเดือนกรกฎาคม 2552 โดยทำการตรวจวินิจฉัย ในเบื้องต้นและตรวจสอบยืนยันการติดเชื้อไวรัส ด้วยดีเอ็นเอไพร์เมอร์ที่มีความจำเพาะต่อชนิด ไวรัสในวิธีการ RT -PCR ในปีแรกของการศึกษา-วิจัย (ต.ค. 2550 - ก.ย. 2551) นั้น โครงการวิจัย ได้ดำเนินการศึกษา-วิจัย ระบบ RT.PCR ที่เหมาะสมและสามารถประยุกต์ใช้เพื่อการตรวจสอบ ไวรัส 5 ชนิด ของมันฝรั่ง โดยได้มีการพัฒนาขั้นตอน-วิธีการสกัดแยกกรดนิวคลีอิค (total nucleic acid extraction) จากใบมันฝรั่งที่สะดวกและเหมาะสมซึ่งสามารถใช้ได้กับการตรวจสอบไวรัสของ มันฝรั่งทั้งชนิดที่มีสารพันธุกรรมเป็น RNA หรือ DNA และการพัฒนาระบบ RT-PCR เพื่อการ ตรวจสอบไวรัสที่มีหาง poly(A) ที่ปลาย 3 ของ RNA ในปีที่สอง (ต.ค. 2551 - ก.ย. 2552) โครงการวิจัยฯ ได้ทำการพัฒนาวิธีการตรวจสอบ PVA PVX PVY และ PLRV เพื่อให้ได้ระบบ ของRT-PCR ที่เหมาะสม โดยทำการออกแบบดีเอ็นเไพร์เมอร์ที่มีความจำเพาะหรือกึ่งจำเพาะต่อชนิด ของไวรัสทั้งสี่ชนิด โดยอาศัยข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์ของสารพันธุกรรมของไวรัสแต่ละชนิดจาก ฐานข้อมูลพันธุกรรม GenBank และนำมาใช้เป็นไพร์เมอร์ใน PCR เพื่อทดสอบความจำเพาะ เจาะจง และความไวในการตรวจสอบไวรัสแต่ละชนิด จากการทดสอบ โครงการวิจัยฯได้คัดเลือก และพัฒนาระบบตรวจสอบ PVA PVX PVY และ PLRV ด้วยคู่ดีเอ็นเอไพร์เมอร์ A05F/A04R, X01F/X02R, YO2F/V03R และ R38F/R32R ในวิธี RT-PCR ตามลำดับ นอกจากนี้ โครงการวิจัยฯ ได้ทำการพัฒนาระบบการตรวจวินิจฉัยโรคไวรัสของมันฝรั่งโดยการตรวจสอบ PVY และ PLRV จากเนื้อเยื่อใบ ในหลอดทดลองเดี่ยวในครั้งเดียว โดยวิธีการตรวจสอบไวรัสในลักษณะ duplex RT-PCR ด้วยคู่ไพร์เมอร์ Y02F และ Y03R ร่วมกับ R38F และ R32R โดยใช้ oligo (dT) และ R32R เป็น ไพร์เมอ ในปฏิกิริยาการถอดรหัสแบบย้อนกลับ (RT)