การพัฒนารีคอมบีแนนท์โปรไบโอติคเพื่อเพิ่มกรดไขมันไม่อิ่มตัวสูงปลาสวายเนื้อขาว

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์ที่จะพัฒนาโปรไบโอติกชนิดรีคอมบีแนนท์ยีสต์ Saccharomyces cerevisiae ที่มีความสามารถในการผลิตเอนไซม์ delta 6 desaturase และศึกษาผลของการเสริมโปรไบโอติกชนิดรีคอมบีแนนท์ยีสต์ในอาหารปลาสวายเนื้อขาว (Pangasianodon hypophthalmus) ยีน fatty acid desaturase 2 (fads2) โคลนจากตับปลาสวาย (Phy-fads2) มีนิวคลีโอไทด์ 1338 bp และสามารถแปลเป็นโปรตีนได้ 445 กรดอะมิโน รีคอมบีแนนท์ยีสต์ (RY-fads2) ถูกผลิตโดยการถ่ายโอนชุดยีนที่ประกอบด้วย TEF promoter, ยีน Phy-fads2 และ CYC1 transcription terminator และถ่ายโอนเข้าสู่ยีสต์ S. cerevisiae เพื่อผลิตรีคอมบีแนนท์ยีสต์ S. cerevisiae (RY-fads2) ตรวจวิเคราะห์การแสดงออกของรีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 โดยใช้เทคนิค Realtime PCR และรีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 แสดงกิจกรรมของเอ็นไซม์ delta 6 desaturase โดยการเปลี่ยน C18:2n6 เป็น C18:3n6 และเปลี่ยน C18:3n3 เป็น C18:4n3 ผลของการใช้รีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 เป็นสารเสริมโปรไบโอติกในอาหารปลาสวายเนื้อขาวต่อสมรรถนะการเจริญเติบโต องค์ประกอบทางเคมีของตัวปลา องค์ประกอบของกรดไขมันในเนื้อและไขมันในช่องท้องของปลาสวาย ค่าทางโลหิตวิทยา ค่าชีวเคมีในเลือด ค่าภูมิคุ้มกันแบบไม่จำเพาะ และประชากรจุลินทรีย์ในลำไส้ของปลาสวาย การวางแผนการทดลองประกอบด้วยกลุ่มทดลอง 7 กลุ่ม ได้แก่ กลุ่มที่ใช้อาหารพื้นฐาน (Control), กลุ่มทดลองที่ใช้อาหารเสริมยีสต์ WT ที่ระดับ 106 (WT 106) เซลล์ต่อกรัมอาหาร และที่ระดับ 108 (WT 108) เซลล์ต่อกรัมอาหาร กลุ่มทดลองที่ใช้อาหารเสริมยีสต์ RY-pTEF ที่ระดับ 106 (RY-pTEF106) เซลล์ต่อกรัมอาหาร และที่ระดับ 108 (RY-pTEF108) เซลล์ต่อกรัมอาหาร กลุ่มทดลองที่ใช้อาหารเสริมยีสต์ RY-fads2 ที่ระดับ 106 (RY-fads2 106) เซลล์ต่อกรัมอาหาร และที่ระดับ 108 (RY-fads2 108) เซลล์ต่อกรัมอาหาร เป็นระยะเวลา 120 วัน โดยทำการเก็บข้อมูลและเก็บตัวอย่างที่ระยะเวลา 60 วัน และ 120 วัน ผลการศึกษาพบว่าการเสริมรีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 ในอาหารปลาสวาย ที่ระยะเวลาการเลี้ยง 120 วัน สามารถเพิ่มสมรรถนะการเจริญเติบโต ได้แก่ ค่าน้ำหนักตัวสุดท้าย น้ำหนักตัวที่เพิ่ม ค่าอัตราการเจริญเติบโตจำเพาะเพิ่มขึ้น และมีค่าอัตราการเปลี่ยนอาหารเป็นเนื้อต่ำลงอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (P< 0.05) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม และมีกรดไขมัน C18:4n3, C18:3 n6 และกรดไขมันรวม ?3 (??3) ในเนื้อปลาและไขมันในช่องท้องของปลาสวายเพิ่มขึ้น (P< 0.05) การเสริมรีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 ในอาหารปลาสวาย ไม่มีผลต่อองค์ประกอบทางเคมีของตัวปลา, ค่าทางโลหิตวิทยา (จำนวนเม็ดเลือดแดง ฮีโมโกลบิน และค่าเม็ดเลือดแดงอัดแน่น) และค่าชีวเคมีในเลือด (ค่ากลูโคส, ค่าคอเรสเตอรอล, ค่าไตรกลีเซอไรด์, ค่าโปรตีนรวม, ค่าอัลบูมิน, ค่าปริมาณยูเรียไนโตรเจน, ค่าฟอสฟอรัส, ค่าคลอไรด์, ค่าแคลเซียม, ค่าแมกนีเซียม และค่าธาตุเหล็ก) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มทดลองที่เสริมยีสต์ RY-pTEF, ยีสต์ WT และกลุ่มควบคุม (P>0.05) ปลาสวายในกลุ่มทดลองที่มีการเสริมยีสต์มีค่าภูมิคุ้มกันแบบไม่จำเพาะ (Total Ig, Lysozyme และ ACH50) เพิ่มสูงขึ้น และพบการเปลี่ยนแปลงประชากรจุลินทรีย์ในลำไส้ปลาในกลุ่มที่มีการเสริมยีสต์ โดยมีจำนวนจุลินทรีย์รวม จุลินทรีย์กลุ่มยีสต์และเชื้อราสูงขึ้น และจุลินทรีย์กลุ่ม Vibrio spp. ลดลงอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (P< 0.05) นอกจากนี้รีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 สามารถตรวจพบในลำไส้ปลาสวายที่เลี้ยงด้วยอาหารเสริมยีสต์ RY-fads2 แสดงให้เห็นว่ายีสต์ RY-fads2 สามารถมีชีวิตอยู่ได้ในสภาวะแวดล้อมของลำไส้ปลาสวายได้ จากผลการศึกษาแสดงให้เห็นว่ารีคอมบีแนนท์ยีสต์ RY-fads2 สามารถผลิตเอนไซม์ delta 6 desaturase และสามารถเปลี่ยนกรดไขมัน C18:2n6 เป็น C18:3n6 และเปลี่ยน C18:3n3 เป็น C18:4n3 ได้ ดังนั้นรีคอมบิแนนท์ยีสต์ RY-fads2 สามารถใช้เป็นโปรไบโอติคในอาหารปลาสวายได้ และสามารถใช้เป็นสารเสริมในอาหารในการเพิ่ม PUFA ชนิด C18:3n6 และ C18:4n3 ได้

คำสำคัญ