การพัฒนาวิธีตรวจแอนติบอดีต่อโรคอหิวาต์สัตว์ปีกในเป็ดด้วยวิธี ELISA

บทคัดย่อ

การทดสอบทางซีรัมวิทยา เช่น agglutination และ indirect hemagglutination assay (IHA) เป็นวิธีการที่แนะนาสาหรับการตรวจแอนติบอดีต่อเชื้อ Pasteurella multocida ในซีรัมของสัตว์ปีกแต่วิธีดังกล่าวเป็นวิธีการที่มีความไวต่า วิธี enzyme-linked immunosorbent assays หรือ ELISA เป็นเครื่องมือที่ใช้ในการเฝ้าระวังการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันในสัตว์ปีกที่ได้รับวัคซีนแต่วิธีการดังกล่าวยังไม่เหมาะสมสาหรับใช้ในการตรวจวินิจฉัยโรค ชุดตรวจ ELISA เพื่อประเมินแอนติบอดีต่อเชื้อ P. multocida มีจาหน่ายเฉพาะในการตรวจแอนติบอดีในไก่และไก่งวง แต่ไม่มีสาหรับตรวจแอนติบอดีในเป็ด ดังนั้นในการศึกษาครั้งนี้จะรายงานวิธีการและการทดสอบให้เป็นมาตรฐานของวิธีการตรวจแอนติบอดีของเป็ดต่อเชื้อ P. multocida ด้วยวิธี ELISA ซึ่งจะทาการเปรียบเทียบวิธีการตรวจระหว่างวิธี ELISA และ IHA ในกลุ่มตัวอย่างเดียวกันด้วยวิธี Bayesian วิธี ELISA จะมีปฏิกิริยาที่เหมาะสมเพื่อใช้ตรวจแอนติบบอดีของเป็ดต่อเชื้อ P. multocida ได้แก่ การเคลือบก้นหลุมด้วย heat extract antigen ขนาด 1 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ซีรัมเป็ดที่ต้องการตรวจแอนติบอดีนามาทาละลายที่สัดส่วน 1:100 และใช้แอนติบอดีชนิดที่ 2 (dIgG-HRP) นามาทาละลายที่สัดส่วน 1:2,000 ซึ่งจะให้ค่าจุดตัด (cut-off value) ของค่าการดูดกลืนแสงของวิธีการเท่ากับ 0.200 การปรับปฏิกิริยา ELISA ให้เหมาะสมจะใช้แอนติบอดีบวกต่อซีรัมเป็ดที่ได้รับวัคซีนชนิดแบคทีรินต่อเชื้อ P. multocida และใช้ซีรัมของลูกเป็ดอายุ 1 วันเป็นซีรัมเป็ดที่ไม่มีแอนติบอดีต่อเชื้อ P. multocida เมื่อนาไปตรวจแอนติบอดีในตัวอย่างซีรัมเป็ด พบว่ามีตัวอย่างซีรัมที่ให้ผลบวกด้วยวิธี ELISA ต่อเชื้อ P. multocida เป็นร้อยละ 89.05 (244/274) โดยจากการคานวณทางสถิติพบว่าวิธี ELISA มีความไวของวิธีการเท่ากับร้อยละ 94.7 [95% posterior probability interval (PPI) = 89.6-98.2%] และมีความจาเพาะเท่ากับร้อยละ 87.2 (PPI = 68.2-98.3%) โดยที่วิธีการ IHA มีความไวของวิธีการเท่ากับร้อยละ 97.6 (PPI = 93.2-99.7%) และมีความจาเพาะเท่ากับร้อยละ 76.5 (PPI = 65.8-85.4%) ดังนั้นจึงสรุปได้ว่าวิธีการ ELISA ที่พัฒนาขึ้นสามารถใช้ในการตรวจแอนติบอดีของเป็ดต่อเชื้อ P. multocida ที่ก่อโรคอหิวาต์สัตว์ปีกได้

คำสำคัญ