ศึกษาผลของวิธีการและระยะเวลาในการเก็บรักษาตัวอย่างเนื้อเยื่อกุ้งต่อผลการตรวจเชื้อก่อโรคตับวายเฉียบพลัน (VPAHPND) ด้วยเทคนิค multiplex PCR, nested PCR และ real time PCR
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
ศึกษาผลของวิธีการและระยะเวลาในการเก็บรักษาตัวอย่างเนื้อเยื่อกุ้งต่อผลการตรวจเชื้อก่อโรคตับวายเฉียบพลัน (Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease : AHPND) ด้วยเทคนิค multiplex PCR, nested PCR และ real time PCR โดยให้กุ้งขาวแวนนาไม (Litopenaeus vannamei) รับเชื้อ VpAHPND ด้วยการแช่ (immersion) ที่ระดับความเข้มข้นของเชื้อ 102, 103, 104 และ 105 CFU/ml เป็นเวลา 6 ชั่วโมง แล้วเปลี่ยนถ่ายน้ำ และเก็บตัวอย่างกุ้งที่ 48 ชั่วโมงหลังการแช่ แยกเก็บตัวอย่างเป็น 3 รูปแบบ คือเก็บตัวอย่างตรวจทันทีเป็นตัวแทนของตัวอย่างมีชีวิต (live) และเก็บตัวอย่างรักษาสภาพโดยการแช่แข็ง (frozen) และเก็บรักษาสภาพในเอทานอลความเข้มข้น 95% (alcohol fixed) เป็นระยะเวลา 3, 7, 14, 30, 60 และ 90 วัน ผลการทดลองพบว่าปริมาณแบคทีเรียวิบริโอรวมในเนื้อเยื่อกุ้งมีชีวิตมีค่า 1.30x104, 4.84x105, 6.14x105, 1.08x107 CFU/ml ตามลำดับ เมื่อตรวจด้วยเทคนิค multiplex PCR โดยไม่มีการบ่มเพิ่มปริมาณแบคทีเรีย (non-enrichment) พบว่าความไว (sensitivity) มีค่า 0, 16.67, 16.67 และ 83.33% เมื่อบ่มเพิ่มปริมาณแบคทีเรีย (enrichment) sensitivity เพิ่มขึ้นเป็น 83.33, 66.67, 100 และ 100% ตามลำดับ เมื่อตรวจด้วยเทคนิค nested PCR โดยไม่มีการบ่มเพิ่มปริมาณแบคทีเรีย sensitivity มีค่า 16.67, 16.67, 100 และ 100% ตามลำดับ เมื่อบ่มเพิ่มปริมาณแบคทีเรีย sensitivity เพิ่มขึ้นเป็น 100% ทุกระดับเชื้อ ในขณะที่การตรวจด้วยเทคนิค real time PCR มี sensitivity ของการตรวจ 100% ทุกระดับเชื้อทั้งตัวอย่างที่ไม่เพิ่มและเพิ่มปริมาณแบคทีเรีย ตัวอย่างที่เก็บรักษาด้วยการแช่แข็งและรักษาสภาพใน เอทานอลความเข้มข้น 95% พบว่าระดับเชื้อและระยะเวลาการเก็บรักษามีผลต่อ sensitivity ของการตรวจ โดยตัวอย่างเชื้อที่ระดับ 102-104 CFU/ml เมื่อตรวจด้วยเทคนิค multiplex PCR และ nested PCR มี sensitivity สูงสุดที่ 33.33% และ 66.67 % ตามลำดับ ในขณะที่เทคนิค real time PCR สามารถตรวจพบเชื้อได้ทุกตัวอย่างถึงวันที่ 7 หลังการเก็บรักษาสภาพตัวอย่างทั้งสองวิธีและมี sensitivity 100% หลังจากนั้น sensitivity จะลดลงตามระยะเวลาการเก็บรักษา สำหรับตัวอย่างที่มีปริมาณเชื้อระดับ 105 CFU/ml การตรวจด้วยเทคนิค multiplex PCR และ nested PCR มี sensitivity ที่ 100% เมื่อตรวจตัวอย่างแช่แข็ง ตัวอย่างแช่แข็งที่มีการบ่มเพิ่มปริมาณแบคทีเรีย และตัวอย่างแช่แอลกอฮอล์ หลังการเก็บรักษานาน 3, 14 และ 14 วัน ตามลำดับ ในขณะที่การตรวจด้วยเทคนิค real time PCR มี sensitivity 100% ทุกวิธีการเก็บรักษาได้นานถึง 14 วัน