การเจริญจนครบกำหนดคลอดของตัวอ่อนกระทิงโคลนนิ่งข้ามสปีชีย์หลังจากบ่มในสารเคมีที่ยับยั้งการดึงหมู่อะเซทิลบนโปรตีนฮีสโตนออก

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ ในปัจจุบันเทคโนโลยีการโคลนนิ่งสามารถผลิตสัตวเ์กิดมาได้หลายชนิด แต่ยงัได้ตัวอ่อนที่มี คุณภาพดีและอตัราลูกสตัวเ์กิดมาในอตัราต่า ซ่ึงมีปัจจยัหลายประการที่เกี่ยวขอ้ง ปัจจยัหลกัของเทคโนโลยี การโคลนนิ่งคือการ reprogram ที่ผิดปกติในตวัอ่อนโคลนนิ่ง สา หรับการโคลนนิ่งกระทิงจา เป็นตอ้งทา โคลนนิ่งขา้มสปีชีส์เนื่องจากขาดแหล่งของไซโตพลาสซึมตวัรับและสตัวต์วัรับ โดยเฉพาะอยา่ งยงิ่ ผลสา เร็จ การโคลนนิ่งขส้ มสปีชีส์ในกระทิงยงัต่า มากเมื่อเปรียบเทียบกบั สตัวช์ นิดอื่น ดงัน้นั ในการศึกษาคร้ังน้ีจึงให้ ความสนใจในการปรับปรุงการ reprogram ของตวัอ่อนกระทิงโคลนนิ่งขา้มสปีชีส์ดว้ยการทดสอบการใช้ สารเคมี 4 ตวั ไดแ้ก่ sodium butyric acid (NaBu) suberoylanilidehydroxamic acid (SAHA) Scriptaid และ 5-aza-2-deoxycytidine (5-aza-dC) เพื่อช่วยปรับปรุงการ reprogram ให้ดีข้ึน จากผลการทดลองพบว่า NaBu ที่ความเข้มข้น 0.5 mM บ่มกบั ตวัอ่อนหลงัเชื่อมเซลลเ์ป็นเวลา 12 ชวั่ โมงSAHA ที่ความเข้มข้น 1 ?M บ่มกบั ตวัอ่อนหลงัเชื่อมเซลลเ์ป็นเวลา 12 ชวั่ โมงScriptaid ที่ความเข้มข้น 0.5 ?M บ่มกบั ตวัอ่อนหลงัเชื่อม เซลล์เป็ นเวลา 12 ชวั่ โมง และ 5-aza-dC ที่ความเข้มข้น 0.1 ?M บ่มกบั ตวัอ่อนหลงัเชื่อมเซลล์เป็นเวลา 12 ชั่วโมง สามารถช่วยเพิ่มการเจริญถึงระยะบลาสโตซีสต์ของตัวอ่อนกระทิงโคลนนิ่งขา้มสปีชีส์ ผล การศึกษาการเติมหมู่อะเซทิลบนฮีสโตนโปรตีนที่ตา แหน่ง H4K5 พบว่ากลุ่มที่เติมดว้ย NaBu, SAHA และ Scriptaid สามารถเพมิ่ ข้ึนอยา่ งมีนยัสา คญั ทางสถิติเมื่อเปรียบเทียบกบักลุ่มที่ไม่ไดเ้ติม แต่กลุ่มที่เติม 5-azadC ไม่เพมิ่ ข้ึน การศึกษาการแสดงออกของยนี Oct4, Cdx2, Gcn5, Hat1และ Hdac1 ในตวัอ่อนระยะ1 เซลล์ ระยะ 8 เซลล์ และบลาสโตซีสต์พบว่าการเติมสารเคมีท้งั 4 ตวัสามารถเพิ่มการแสดงออกของยีน Oct4, Cdx2, Gcn5และ Hat1ในตวัอ่อนระยะ1 เซลล์และ 8 เซลล์อยา่ งมีนัยสา คญั ทางสถิติแต่ไม่เพิ่มในตวัอ่อน ระยะบลาสโตซีสต์นอกจากน้ีสารเคมีท้งั 4 ตัวสามารถลดการแสดงออกของยีน Hdac1อยา่ งมีนัยสา คญั ทาง สถิติการศึกษาอัตราการต้งัทอ้งของตวัรับหลงัจากยา้ยฝากตวัอ่อนที่ได้จากการเติมสารท้งั 4 ตวัพบว่า มี ตวัรับต้งัทอ้งในทุกกลุ่มทดลองแต่มีการแทง้ท้งัหมดจึงไม่มีลูกกระทิงโคลนนิ่งขา้มสปีชีส์เกิดมา จากการ ทดลองสามารถสรุปไดว้่า NaBu, SAHA, Scriptaid และ 5-aza-dC สามารถเพิ่มอตัราการเจริญชองตวัอ่อน กระทิงโคลนนิ่งขา้มสปีชีส์ถึงระยะบลาสโตซีสต์ส่วนการเพิ่มการเติมหมู่อะเซทิลบนฮีสโตนโปรตีนที่ ตา แหน่ง H4K5 น้นั NaBu, SAHA และ Scriptaid สามารถทา ใหเ้พมิ่ ข้ึน ยกเวน้ 5-aza-dC ที่ไม่ช่วยทา ใหเ้พม

คำสำคัญ