เอนไซม์โปรตีเนสจากลำไส้ปลาทูน่าพันธุ์โอแถบ: การทำบริสุทธิ์และการจำแนกคุณลักษณะ

บทคัดย่อ

เอนไซม์ทริปซินสองไอโซฟอร์ม (เอ และ บี) จากลำไส้ปลาทูน่าพันธุ์โอแถบสามารถทำบริสุทธิ์โดยการใช้ Sephacryl S-200 Sephadex G-20 และ DEAE-cellulose ตามลำดับ โดยเอนไซม์ทริปซิน เอ และ บี มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 177 และ 257 เท่า และได้ผลผลิตร้อยละ 23 และ 21 ตามลำดับ เอนไซม์ทริปซินที่ผ่านการทำบริสุทธิ์ปรากฏเป็นแถบโปรตีนเดี่ยวบนเจลของ native-PAGE เมื่อตรวจสอบด้วยวิธีเจลฟิวเตรชันและ SDS-PAGE เอนไซม์ทริปซินทั้งสองมีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ 24 กิโลดาลตัน เอนไซม์ทริปซิน เอ และ บี มีกิจกรรมสูงสุดที่อุณหภูมิ 55 และ 60 องศาเซลเซียส ตามลำดับ และมีพีเอชที่เหมาะสมที่ พีเอช 9 เอนไซม์ทั้งสองมีความคงตัวในช่วงอุณหภูมิไม่เกิน 50 องศาเซลเซียส และมีความคงตัวในช่วงพีเอช 6-11 แคลเซียมไอออนมีผลเพิ่มความคงตัวต่อเอนไซม์ทริปซิน เอ และ บี กิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินทั้งสองลดลงอย่างต่อเนื่องเมื่อความเข้มข้นของเกลือเพิ่มขึ้น (ร้อยละ 0-30) และถูกยับยั้งโดยสารยับยั้งจำเพาะกับเอนไซม์ทริปซิน เช่น สารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากถั่วเหลือง และ N-p-tosyl-L-lysine chloromethyl ketone เอนไซม์ ทริปซิน เอ และ บี มีค่า Km และ Kcat เท่ากับ 0.22-0.31 มิลลิโมลาร์ และ 69.5-82.5 ต่อวินาที ตามลำดับ จากการตรวจสอบลำดับของกรดอะมิโนปลายสายด้านหมู่ อะมิโนจำนวน 20 หน่วยย่อย พบว่าเอนไซม์ทริปซิน เอ และ บี มีลำดับของกรดอะมิโนปลายสายด้านหมู่อะมิโน คือ IVGGYECQAHSQPPQVSLNA และ IVGGYECQAHSQPPQVSLNS ตามลำดับ

คำสำคัญ