การทำบริสุทธิ์และการจำแนกคุณลักษณะสารยับยั้ง เอนไซม์ย่อยโปรตีนจากเมล็ดถั่วเขียว

บทคัดย่อ

จากการศึกษาการสกัดและการจำแนกคุณลักษณะของสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากเมล็ดถั่วเขียวที่เจริญในประเทศไทย พบว่า น้ำกลั่นเป็นตัวสกัดที่เหมาะสมที่สุดในการสกัดสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากเมล็ดถั่วเขียวที่ผ่านการกำจัดไขมัน (P<0.05) เวลาในการสกัดมีผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติต่อการสกัดสารยับยั้ง (P<0.05) โดยพบว่าเวลาในการสกัด 2 ชั่วโมงเป็นเวลาที่เหมาะสมที่สุดในการสกัดสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากเมล็ดถั่วเขียว สารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากเมล็ดถั่วเขียวสามารถทำบริสุทธิ์โดยการให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 90 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 นาที ตามด้วยการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ระดับความอิ่มตัว ร้อยละ 30-65 และการใช้เจลฟิลเตรชัน ชนิด Sephadex G-50 โดยสารยับยั้งมีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 13.51 เท่าและได้ผลผลิตร้อยละ 30.25 สารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินมีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ 14 กิโลดาลตัน เมื่อทำการตรวจสอบโดย SDS-PAGE และ inhibitory activity staining อย่างไรก็ตามสารยับยั้งที่ผ่านการทำบริสุทธิ์ไม่มีกิจกรรมภายใต้สภาวะรีดิวซิง (สภาวะที่มี ?ME) สารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินที่ผ่านการทำบริสุทธิ์มีความตัวต่อความร้อนที่อุณหภูมิ 90 องศาเซลเซียส เป็นเวลาไม่เกิน 50 นาที และมีความคงตัวต่อพีเอชในช่วงกว้าง โซเดียมคลอไรด์ที่ระดับความเข้มข้นร้อยละ 0-3 ไม่มีผลต่อกิจกรรมของสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินที่ผ่านการทำบริสุทธิ์จากเมล็ดถั่วเขียว

คำสำคัญ