การพัฒนาเชื้อสายมะเร็งของคนโดยวิธีใส่ยีนรายงานลูซิเฟอร์เรสเพื่อการตรวจสอบทางชีวภาพหาสารเอสโตรเจน
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
มีรายงานจำนวนมากที่ได้รับความสนใจจากสาธารณะกล่าวถึงสารเคมีหลายชนิดในสิ่งแวดล้อมที่อาจเลียนแบบฮอร์โมนเอสโตรเจนตามธรรมชาติและเข้าไปรบกวนการทำหน้าที่ของระบบต่อมไร้ท่อ ผลก็คือทำให้มีการทำวิจัยเรื่องนี้เพิ่มขึ้น งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์ในการพัฒนากระบวนการตรวจสอบปฏิกิริยาของเอสโตรเจนและสารออกฤทธิ์เลียนแบบเอสโตรเจนโดยใช้เซลล์เชื้อสายมะเร็งเต้านม MCF-7 เนื่องจากมีตัวรับเอสโตรเจน (ER) จึงเหมาะสมที่จะนำมาเป็นแบบจำลองในการตรวจสอบสารก่อมลภาวะคล้ายเอสโตรเจน นำเซลล์มาเลี้ยงในน้ำยาเลี้ยงเซลล์ภายใต้สภาวะมาตรฐานแต่ไม่ได้ผสมฮอร์โมน จากนั้นนำเอาตัวอย่างสารมาตรฐาน 2 ชนิด ได้แก่ 17?-เอสตราไดออล และเอนดริน และผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติอีก2 ชนิด ได้แก่ น้ำมะพร้าวอ่อน (Cocos nucifera) และสมุนไพรช่วยกระชับสัดส่วนร่างกายคือ กวาวเครือขาว (Pueraria mirifica)มาทำการทดสอบ นำตัวอย่างสารเหล่านี้มาทำความเข้มข้นลำดับส่วนและใส่ลงในเซลล์ที่เลี้ยงไว้เพื่อประเมินความเป็นพิษต่อเซลล์และการยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์โดยใช้ MTT assay พบว่าตัวอย่างทั้งหมดแสดงปฏิกิริยาในลักษณะทวิบถโดยมีความเข้มข้นที่แน่นอนของสารแต่ละชนิด การตรวจสอบกลไกในระดับอณูชีววิทยาจากกลุ่มยีนที่เกี่ยวข้องกับวิถีเอสโตรเจน ได้แก่ ER?, Akt, PI3K, TFRCและ SULT1E1 พบว่าการเพิ่มจำนวนเซลล์ของตัวอย่างทั้งหมดมีปฏิกิริยาผ่านการควบคุมของ ER? นอกจากนี้เพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ในการประเมินเพื่อคัดเบื้องแรกที่ต้องตรวจสอบตัวอย่างจำนวนมาก และให้มีความไวต่อปฏิกิริยาเอสโตรเจนจากสารประกอบต่างๆในธรรมชาติ ได้มีการจัดทำเซลล์รายงานขึ้น มีการใส่ระบบยีนรายงานที่จัดสร้างบนพลาสมิดเข้าไปในเซลล์ MCF-7 เป็นผลสำเร็จและเป็นแบบเสถียร ทำให้ได้เซลล์เชื้อสายใหม่ที่รายงานปฏิกิริยาเอสโตรเจนขึ้นมาคือ MCF-7-CAT-DsRed เซลล์เชื้อสายนี้ตรวจจับปฏิกิริยาการตอบสนองต่อเอสโตรเจนโดยผ่านคลอแรมฟีนิคอลอะเซธิลทรานสเฟอร์เรส (CAT) ซึ่งเป็นโปรตีนรายงานที่สร้างออกมาและจำแนกได้โดยเทคนิค ELISA ภายใต้เครื่องอ่านจานเลี้ยงเซลล์ขนาดเล็ก ในการตรวจสอบความไวมีการเลี้ยงเซลล์ MCF-7-CAT-DsRed ในน้ำยาที่ผสมตัวอย่างคล้ายกับที่กล่าวมาข้างต้น ผลปรากฏว่าเซลล์เชื้อสายรายงานนี้มีการตอบสนองและแสดงความไวต่อความเข้มข้นที่มีผลต่ำสุดที่สังเกตได้ (LOEC) ของตัวอย่างที่ทดสอบทั้งหมดได้ดีกว่าเซลล์ MCF-7 เดิม ข้อมูลจากงานวิจัยนี้แสดงให้เห็นอย่างชัดเจนว่ากระบวนการตรวจสอบโดยใช้ MCF-7-CAT-DsRedมีความเหมาะสมกว่าที่จะใช้ในการตรวจจับทางชีวภาพของสารรบกวนต่อมไร้ท่อประเภทเอสโตรเจนโดยระบบจานเลี้ยงทั้งในด้านความไว การตรวจวัดในเชิงปริมาณ และการคัดเบื้องแรกเมื่อมีตัวอย่างจำนวนมาก