ลำดับเบสของ inhibitory RNA element ในบริเวณ late 3untranslated region (3UTR) ของ bovine papillomavirus ทัปย์ 3 (BPV-3) และปฏิสัมพันธ์ระหว่าง element กับโปรตีนของ HeLa cells
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
งานวิจัยก่อนหน้านี้พบว่า ลำดับนิวคลีโอไทด์ใน late 3’UTR ของ BPV-3 genome มีอิทธิพลต่อการควบคุมการแสดงออกของยีนทั้งในระดับ mRNA และโปรตีน (ทุนงบประมาณแผ่นดินประจำปี 2555-2556) งานวิจัยนี้ทำการศึกษาต่อยอดจากงานวิจัยที่แล้ว มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาช่วงนิวคลีโอไทด์ใน late 3’UTR ของ BPV-3 ที่มีอิทธิพลในการควบคุมการแสดงออกของยีนโดยใช้ pSV ซึ่งมียีน beta-galactosidase หรือ lac Z เป็น reporter gene และทำการแทรกชิ้นส่วน late 3’UTR ของไวรัสขนาดต่างๆ ที่มีการตัดลำดับนิวคลีโอไทด์จากปลายด้าน 5’ ทีละช่วง ส่วนปลายด้าน 3’ สิ้นสุดที่ตำแหน่ง poly A signal ตำแหน่งสุดท้าย พลาสมิดลูกผสมที่เตรียมได้ถูกถ่ายโอนเข้าสู่ HeLa cell (co-transfection) พร้อมกับ pEGFP ซึ่งใช้เป็น internal control สำหรับ transfection efficiency ตรวจสอบการควบคุมการแสดงออกในระดับ mRNA โดยเทคนิค reverse transcription PCR และในระดับโปรตีนโดย beta-galactosidase activity assay ผลการทดลองพบลำดับนิวคลีโอไทด์ที่มีฤทธิ์ยับยั้งการแสดงออกของยีน lac Z สามช่วงดังนี้ 1) ขนาด 163 เบส มีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 6668 – 6830 ยับยั้งการแสดงออกทั้งในระดับ mRNA และโปรตีน 2) ขนาด 75 เบส มีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 6851 – 6925 ยับยั้งการแสดงออกเพียงในระดับโปรตีน และ 3) ขนาด 94 เบส ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ 6926 – 7019 ยับยั้งการแสดงออกเพียงในระดับ mRNA เมื่อวิเคราะห์ binding sites ของ RNA-binding protein ที่ปรากฏบน late 3’UTR ของไวรัส พบ binding sites ของโปรตีนหนาแน่นในนิวคลีโอไทด์ทั้งสามช่วง โดยในช่วงที่ 1 พบ binding sites ของโปรตีนจำนวนมากที่เกี่ยวข้องกับ mRNA 3’ processing เช่น splicing factor, polyadenylation และ mRNA translation ในช่วงที่ 2 พบโปรตีนจำนวนมากเกี่ยวข้องกับ mRNA export, mRNA translation, และ mRNA stability ในช่วงที่ 3 พบโปรตีนจำนวนมากเกี่ยวข้องกับ mRNA splicing และ mRNA degradation โดยผู้วิจัยสันนิษฐานว่า splicing factor เหล่านี้มีบทบาทสำคัญต่อ mRNA 3’ processing ดังที่พบในกรณีของ BPV-1 และ HPV-16 จากงานวิจัยนี้สรุปได้ว่าใน late 3’UTR ของ BPV-3 มีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ทำหน้าที่เป็น controlling element อยู่ 3 ช่วง ซึ่งในแต่ละช่วงทำหน้าที่ร่วมกันในการยับยั้งการแสดงออกของยีนทั้งในระดับ mRNA และโปรตีน