การพัฒนาและประเมินวิธีการตรวจวินิจฉัยโรคเมลิออยโดสิส (melioidosis) ด้วยวิธี loop-mediated isothermal amplification (LAMP)

บทคัดย่อ

Burkholderia pseudomallei เป็นแบคทีเรียแกรมลบที่ก่อโรคเมลิออยโดสิส (melioidosis) ซึ่งเป็นโรคที่มีอันตรายถึงชีวิต การตรวจทางห้องปฏิบัติการที่รวดเร็วจะช่วยการวินิจฉัยและรักษา เนื่องจากการเพาะเชื้อที่เป็นวิธีมาตรฐานให้ผลช้า การตรวจหาเชื้อจากตัวอย่างโดยตรงด้วยวิธี polymerase chain reaction (PCR) จึงถูกพัฒนาขึ้น อย่างไรก็ดียังมีข้อจำกัดคือ ต้องใช้เครื่อง thermocycler ที่มีราคาสูง ทำให้ไม่สามารถใช้งานในจุดบริการได้ วัตถุประสงค์ของการศึกษา เพื่อพัฒนา loop-mediated isothermal amplification (LAMP) ซึ่งเป็นเทคนิคการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมที่อุณหภูมิเดียว ไม่ต้องใช้เครื่องมือที่ซับซ้อน และการเติมสารสี hydroxynaphthol blue (HNB) ทำให้สามารถอ่านผลได้ด้วยตาเปล่า โดยดูการเปลี่ยนสีของปฏิกิริยา วิธีการศึกษา คัดเลือกไพรเมอร์ ทดสอบสภาวะที่เหมาะสมและความจำเพาะกับเชื้อแบคทีเรียอ้างอิง วิเคราะห์ปริมาณดีเอ็นเอและจำนวนเชื้อ B. pseudomallei ต่ำสุดที่ตรวจได้โดยเปรียบเทียบกับผลการเพาะเชื้อ ผลการศึกษา ไพร์เมอร์ในตำแหน่ง TTSS1-orf2 มีความจำเพาะกับเชื้อ B. pseudomallei สภาวะเหมาะสมที่อุณหภูมิ 63?C เวลา 1 ชั่วโมง ปริมาณดีเอ็นเอต่ำสุดที่ตรวจได้ 185 fg/?l จำนวนเชื้อต่ำสุดในสิ่งส่งตรวจจำลองเลือด เสมหะ และปัสสาวะ เท่ากันที่ 208 CFU/ml และผลการประเมิน LAMP เบื้องต้นกับสิ่งส่งตรวจ เสมหะ หนอง น้ำเจาะจากส่วนต่าง ๆ ของร่างกาย เนื้อเยื่อ ปัสสาวะ และตัวอย่างเชื้อที่เพาะขึ้นจากอาหารเลี้ยงเชื้อผสมเลือด รวมจำนวน 60 ได้ค่าความไวและความจำเพาะ ร้อยละ 100 (ช่วงความเชื่อมั่นที่ร้อยละ 95 85.87-100.0) วิธีที่พัฒนาขึ้นมีความเหมาะสมที่จะใช้ตรวจในจุดบริการผู้ป่วย โดยไม่ใช้เครื่องมือซับซ้อน

คำสำคัญ

ระดับความพร้อมของโครงการ