การประยุกต์ใช้เทคนิคเมทาจีโนมในการค้นหาจุลินทรีย์สายพันธุ์ใหม่ที่ย่อยสลายวัสดุย่อยสลายได้ทางชีวภาพพอลิแอลแลคติกแอซิด

บทคัดย่อ

โครงการใจนี้มีมีวัตถุประสงค์เพื่อสร้าง metogenurnic Ibrany จาก DNA ที่แอกได้จาก ดินที่ฝังแผ่นฟิล์ม PLA และคัดเลือกโคลนที่มี PLA degradation activity จาก metagenomic #brary ซึ่งจากตัวอย่างดินที่เก็บจากบริ เวณอุทยานแห่งชาติ ไร่ข้าวโพด นาข้าว และบริเวณ กองขยะ มีลักษณะดินร่วน สีน้ำตาลถึงสีดำ มีค่า pH 6.94-7.20 เมื่อนำมาสกัด chromosomal DNA ด้วยวิธี CTAB method แล้วกำจัด humic acid โดยการผ่านคอลัมน์ Q-Sephorose พบว่า ได้ DNA ที่บริสุทธิ์ ปริมาณ 180-300 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิลิตร มีสัดส่วน Aวด00/1280 และ A200/230 1.24-1.42 และ 1.79-1.95 ตามลำดับ จึงได้นำ DNA ดังกล่าวมาสร้าง metageagenomic library โดยการนำชิ้นส่วน DNA ขนาด 2-4 kb ที่ย่อยแบบบางส่วน (partial digestion) ด้วย Soน3AI มาเชื่อมกับเวกเตอร์ DUC18 ที่ย่อยด้วย BamH! แล้วถ่ายโอนเข้าไปใน E. col DH10B ด้วยวิธี heat shock โดยพบจำนวนโคลนที่เจริญบน LB agor ที่มี ampicilin ทั้งหมด 85,000 โคลน และมีเพียง 8 โคลนจาก metagenomic library ที่ปรากฏวงใสบนอาหารแข็งที่มี 0.1 % PLA โดยให้ชื่อโคลนเป็น PLA1 ถึง PLA8 แล้วเมื่อนำไปทดสอบแอคติวิตีในการย่อย PLA พบว่า โคลน PLA7 มีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางวงใสกว้างที่สุดเท่ากับ 7.86 มิลลิเมตร บนอาหารแข็งที่ มี PLA และให้ค่ากิจกรรมการย่อย PLA สูงสุดในอาหารเหลวเท่ากับ 1.850 ยูนิตต่อมิลลิลิตร

คำสำคัญ