ผลของการเก็บแยกเซลล์ตัวอ่อนโคโดยเครื่อง piezo-driven และ microblade ก่อนการแช่แข็งตัวอ่อนด้วยวิธี vitrification ต่ออัตรารอดหลังการทำละลายและการเกิด apoptosis

บทคัดย่อ

การเก็บแยกเซลล์จากตัวอ่อนโคเป็นสิ่งที่ท าเพื่อน าเซลล์ที่เก็บได้ไปตรวจเพศตัวอ่อน หรือน าไปท า genomic sequencing ก่อนน าไปย้ายฝากให้โคตัวรับ การเก็บแยกเซลล์จากตัวอ่อนต้องใช้วิธีที่ไม่ท าให้เซลล์ ตัวอ่อนเสียหาย และสามารถน าไปแช่แข็งต่อได้ การทดลองเก็บแยกเซลล์จากตัวอ่อนโคระยะ บลาสโตซีสต์ที่ ผลิตในหลอดแก้วโดยใช้ Microblade และ Piezo-driven พบว่าการเก็บแยกเซลล์จากตัวอ่อนที่ 5 และ 10% จากจ านวนเซลล์ทั้งหมดของตัวอ่อน ไม่ส่งผลต่ออัตราการเจริญของตัวอ่อนถึงระยะแฮชบลาสโตซีสต์แต่ คุณภาพของตัวอ่อนก่อนการเก็บแยกเซลล์จะส่งผลต่ออัตราการเจริญของตัวอ่อน โดยตัวอ่อนเกรด 1 ที่เก็บ แยกเซลล์โดยใช้ทั้ง 2 วิธีออกไป 5 หรือ 10% มีอัตราการเจริญถึงระยะแฮชบลาสโตซีสต์ใกล้คียงกันและไม่ แตกต่างจากกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้เก็บแยกเซลล์ในขณะที่ตัวอ่อนเกรด 2 ที่เก็บแยกเซลล์ด้วย Microblade ออกไป 10% จะส่งผลต่อการเจริญของตัวอ่อนถึงระยะแฮชบลาสโตซีสต์ในขณะที่การเก็บด้วย Piezo-driven ที่ตัดออก 5 และ 10% ไม่ส่งผลต่ออัตราการเจริญของตัวอ่อนถึงระยะแฮช บลาสโตซีสต์ทั้งในกลุ่มตัวอ่อนเกรด 1 และ 2 ตัวอ่อนเกรด 1 ที่ไม่ผ่านการเก็บแยกเซลล์และน าไปแช่แข็งด้วยวิธี vitrification โดยใช้ Cryotop และ 0.25 ml straw ให้อัตราการเจริญถึงระยะแฮชบลาสโตซีสต์ดีกว่าเกรด 2 ส่วนตัวอ่อนที่ไม่ผ่านการแช่ แข็งเกรด 1 มีอัตราการเจริญถึงระยะแฮชบลาสโตซีสต์สูงกว่าตัวอ่อนเกรด 2 เล็กน้อย แต่ไม่แตกต่างอย่างมี นัยส าคัญทางสถิติ ตัวอ่อนเกรด 2 ที่แช่แข็งโดยใช้ Cryotop มีอัตราเจริญถึงระยะบลาสโตซีสต์สูงกว่าที่แช่แข็ง โดยใช้ 0.25 ml straw แต่ไม่แตกต่างอย่างมีนัยส าคัญทางสถิติ ผลการเก็บแยกเซลล์ตัวอ่อนในการทดลองแรกโดยใช้ Microblade และ Piezo-driven พบว่าการใช้ Piezo-driven ให้อัตราการเจริญของตัวอ่อนดีกว่าการใช้ Microblade จึงใช้ Piezo-driven เก็บแยกเซลล์ตัว อ่อน แล้วน าตัวอ่อนไปแช่แข็งด้วยวิธี vitrification โดยใช้ Cryotop และ 0.25 ml straw แล้วศึกษาอัตรา การเกิด apoptosis พบว่าตัวอ่อนกลุ่มควบคุมที่ไม่มีการเก็บเซลล์และไม่มีการแช่แข็งทั้งเกรด 1 และ 2 มี อัตราการเกิด apoptosis ต่ าที่สุด และไม่แตกต่างจากกลุ่มที่เก็บแยกเซลล์ตัวอ่อนและไม่มีการแช่แข็งทั้งเกรด 1 และ 2 ส าหรับกลุ่มไม่มีการเก็บเซลล์และแช่แข็งโดยใช้ Cryotop ทั้งเกรด 1 และ 2 มีอัตราการเกิด apoptosis ไม่แตกต่างกัน แต่สูงกว่ากลุ่มควบคุมที่ไม่มีการเก็บเซลล์และไม่มีการแช่แข็งทั้งเกรด 1 และ 2 อย่างมีนัยส าคัญทางสถิติ และยังสูงกว่ากลุ่มที่เก็บแยกเซลล์ของตัวอ่อนที่ไม่แช่แข็งทั้งเกรด 1 และ 2 อย่างมี นัยส าคัญทางสถิติ ส่วนกลุ่มที่เก็บและไม่เก็บแยกเซลล์ตัวอ่อนและแช่แข็งโดยใช้ Cryotop ตัวอ่อนเกรด 1 มี อัตราการเกิด apoptosis ต่ ากว่าตัวอ่อนเกรด 2 อย่างมีนัยส าคัญทางสถิติ ส่วนกลุ่มที่เก็บและไม่เก็บแยกเซลล์ ตัวอ่อนและแช่แข็งโดยใช้ 0.25 ml straw มีอัตราการเกิด apoptosis สูงกว่ากลุ่มอื่นอย่างมีนัยส าคัญทางสถิติ การทดลองนี้สรุปได้ว่าการแยกเซลล์จากตัวอ่อนโคระยะบลาสโตซีสต์โดยใช้ Piezo-driven ให้ผลดีกว่าการใช้ Microblade การแช่แข็งตัวอ่อนโคระยะบลาสโตซีสต์ด้วยวิธี vitrification ท าให้เพิ่มอัตราการเกิด apoptosis

คำสำคัญ