เชื้อแบคทีเรียที่ดื้อต่อสารต้านจุลชีพที่แยกได้จากแมลงสาปที่พบในโรงพยาบาลสัตว์

บทคัดย่อ

เริ่มจากการสุ่มจับแมลงสาปชนิด American cockroach รวมประมาณ 150 ตัวจาก 3 แหล่ง ได้แก่ โรงพยาบาลสัตว์จำนวน 50 ตัว จากตลาดหรือแหล่งขายอาหารจำนวน 50 ตัว และจากที่อยู่อาศัยจำนวน 50 ตัว โดยวางกับดักเพื่อจับแมลงสาปในตอนกลางคืนและมาเก็บตัวอย่างในตอนเช้าใส่ในหลอดปลอดเชื้อนำกลับมายังห้องปฏิบัติการ เป็นระยะๆในช่วงเวลา 6 เดือน ทำการ immobilization แมลงสาปด้วยการนำไปแช่แข็งที่ 0?C เป็นเวลา 5 นาที จากนั้นเติม 0.9% sterile normal saline 2 ml ลงไปในหลอดบรรจุแมลงสาป ปิดฝาให้แน่นแล้วเขย่านานประมาณ 2 นาทีเพื่อละลายเอาเชื้อออกมาจากลำตัวภายนอกของแมลงสาป ดูดสารละลายที่ได้ 0.01 ml ไปเพาะแยกเชื้อบนอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด enrichment medium และ selective medium โดยบ่มไว้ที่ 37?C นาน 16-18 ชั่วโมง เชื้อที่ได้นำไปแยกชนิดของเชื้อด้วยการย้อมสีแกรม (Gram’s stain) และวิธีทางชีวเคมี หลังจากเตรียมตัวอย่างจากภายนอกลำตัวแมลงสาปแล้วนำตัวแมลงสาปมาล้างด้วย 70% alcohol ประมาณ 5 นาทีแล้วนำมาปล่อยให้แห้ง แล้วล้างด้วย 0.9% sterile normal saline อีกประมาณ 5 นาที จากนั้นทำการผ่าเอาทางเดินอาหารออกมาบดกับ 0.9% sterile normal saline จำนวน 2 ml แล้วนำไปไปเพาะแยกเชื้อแบบเดียวกันกับตัวอย่างจากภายนอกลำตัว ทำการทดสอบความไวของเชื้อต่อยาด้วยวิธี Kirby-Bauer disk diffusion method ซึ่งแนะนำโดย the National Committee for Clinical Laboratory Standards บนอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Mueller-Hinton agar โดยแผ่นยาที่ใช้ประกอบด้วย ampicillin (10 ?g/disk), amoxicillin (10 ?g/disk), amoxicillin/clavulanic acid 2:1 (30 ?g/disk), cefazolin (30 ?g/disk), cephalexin (30 ?g/disk), ceftazidime (30 ?g/disk), cefotaxime (30 ?g/disk), ceftriaxone (30 ?g/disk), aztreonam (30 ?g/disk) bacitracin (10 unit/disk), chloramphenical (30 ?g/disk), doxycline hydrochloride (30 ?g/disk), erythromycin (15 ?g/disk), gentamicin (10 ?g/disk), kanamycin (30 ?g/disk), norfloxacin (10 ?g/disk), ciprofloxacin (5 ?g/disk), penicillin G (10 unit/disk), streptomycin (10 ?g/disk), tetracycline (30 ?g/disk) และ trimetroprim/sulfamethoxazole 1:19 (25 ?g/disk) เริ่มจากการสุ่มจับแมลงสาปชนิด American cockroach รวมประมาณ 150 ตัวจาก 3 แหล่ง ได้แก่ โรงพยาบาลสัตว์จำนวน 50 ตัว จากตลาดหรือแหล่งขายอาหารจำนวน 50 ตัว และจากที่อยู่อาศัยจำนวน 50 ตัว โดยวางกับดักเพื่อจับแมลงสาปในตอนกลางคืนและมาเก็บตัวอย่างในตอนเช้าใส่ในหลอดปลอดเชื้อนำกลับมายังห้องปฏิบัติการ เป็นระยะๆในช่วงเวลา 6 เดือน ทำการ immobilization แมลงสาปด้วยการนำไปแช่แข็งที่ 0?C เป็นเวลา 5 นาที จากนั้นเติม 0.9% sterile normal saline 2 ml ลงไปในหลอดบรรจุแมลงสาป ปิดฝาให้แน่นแล้วเขย่านานประมาณ 2 นาทีเพื่อละลายเอาเชื้อออกมาจากลำตัวภายนอกของแมลงสาป ดูดสารละลายที่ได้ 0.01 ml ไปเพาะแยกเชื้อบนอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด enrichment medium และ selective medium โดยบ่มไว้ที่ 37?C นาน 16-18 ชั่วโมง เชื้อที่ได้นำไปแยกชนิดของเชื้อด้วยการย้อมสีแกรม (Gram’s stain) และวิธีทางชีวเคมี หลังจากเตรียมตัวอย่างจากภายนอกลำตัวแมลงสาปแล้วนำตัวแมลงสาปมาล้างด้วย 70% alcohol ประมาณ 5 นาทีแล้วนำมาปล่อยให้แห้ง แล้วล้างด้วย 0.9% sterile normal saline อีกประมาณ 5 นาที จากนั้นทำการผ่าเอาทางเดินอาหารออกมาบดกับ 0.9% sterile normal saline จำนวน 2 ml แล้วนำไปไปเพาะแยกเชื้อแบบเดียวกันกับตัวอย่างจากภายนอกลำตัว ทำการทดสอบความไวของเชื้อต่อยาด้วยวิธี Kirby-Bauer disk diffusion method ซึ่งแนะนำโดย the National Committee for Clinical Laboratory Standards บนอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Mueller-Hinton agar โดยแผ่นยาที่ใช้ประกอบด้วย ampicillin (10 ?g/disk), amoxicillin (10 ?g/disk), amoxicillin/clavulanic acid 2:1 (30 ?g/disk), cefazolin (30 ?g/disk), cephalexin (30 ?g/disk), ceftazidime (30 ?g/disk), cefotaxime (30 ?g/disk), ceftriaxone (30 ?g/disk), aztreonam (30 ?g/disk) bacitracin (10 unit/disk), chloramphenical (30 ?g/disk), doxycline hydrochloride (30 ?g/disk), erythromycin (15 ?g/disk), gentamicin (10 ?g/disk), kanamycin (30 ?g/disk), norfloxacin (10 ?g/disk), ciprofloxacin (5 ?g/disk), penicillin G (10 unit/disk), streptomycin (10 ?g/disk), tetracycline (30 ?g/disk) และ trimetroprim/sulfamethoxazole 1:19 (25 ?g/disk)

คำสำคัญ