ความหลากหลายและคุณลักษณะระดับโมเลกุลของเชื้อแบคทีเรียในดินที่ปนเปื้อนน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้ว

บทคัดย่อ

การวิจัยในครั้งนี้ศึกษาความหลากหลายของกลุ่มเชื้อแบคที่เรียในดินที่ปนเปื้อน น้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ ใช้แล้ว 3 แหล่ง คือ ดิน A, Bและ C จากร้านซ่อมมอเตอร์ไซด์รอบ ๆ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ อำภอหาดใหญ่ จังห วัดสงขลา โดยหาและเปรียบเทียบชนิดความ หลากหลายของแบกที่เรียประจำถิ่นในดินที่ปนเปื้อนน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วด้วยเทดนิกระดับ โมเลกุล ซึ่งจะศึกษาทั้งแบกทีเรียในดินโดขตรงและแบกที่เรียในดินระหว่างกระบวนการส่งเสริมการเจริญ โดยการทำ Enrichment culure นอกจากนี้ยังศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างกลุ่มเชื้อแบกที่เรีย ปัจจัยทางด้น กายภาพ-เคมีของดินและองค์ประกอบของน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนค์ที่ใช้แล้ว ความหลากหลายของ แบคที่เรียประจำถิ่นสามารถหาได้ทั้งวิธีการเพาะเลี้ยงบนอาห ารเลี้ยงเชื้อ (culuring method) และการ ร่วมกันของวิธีที่ไม่ต้องเพาะเลี้ยงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ (culture-independent methods) ด้วยเทคนิด DGGE และ Ilumi ia Misg ผลการศึกษาความหล ากหลายของแบ ที่เรียประจำถิ่นจากดินที่ปนเปื้อน น้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วโดยดรงทั้ง 3 แหล่งพบว่าเทคนิด MiSe! สามารถหาความหลากหลาย ของชนิดแบกที่เรียได้ 24 ไฟลัม (ร วม candidate divisions) จาก 3449 OTUs และเทคนิก DGGE สามารถ หาความหลากหลายของชนิดแบกที่เรียได้ 3 ไฟลัมจาก 59 0TUs และจากผลการศึกษาดั่งกล่าวพบว่า แบคที่เรียไฟล้ม Proteobacteria โดยเฉ พาะอย่างยิ่งคลาส Gammaproteobacteria Wบมากในดิน A และ B ส่วนไฟลั่ม Fimicutes และ Actinobacteria พบมากในดิน Cจากการวิเคราะห์ความหลากหลายและ ลักษณะของกลุ่มเชื้อแบกที่รียประจำถิ่นในดินที่ปนเปื้อนน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วด้วยเทกบิค DGGE ในระหว่างกระบวนการส่งเสริมการเจริญ โดยการทำ Enrichment culure 3 ครั้งอย่างต่อเนื่อง ภายใน 3 สัปดาห์ ผลการทดลองพบว่าเทนิค DGGE สามารถหาความหลากหลายของชนิดแบคที่เรียใน ระหว่างการทำ Enrichment culture ได้ 4 ไฟลัม จาก 278 OTUs ได้แก่ Proteobacteria, Bacteroidetes,Finmicutes และ Actinobacteria ซึ่งคลาส Gammaproteobacteria เป็นคลาสที่พบมากทั้งใน enrichment culture A, B และ C จากผลการศึกษาความหลากหลายและคุณลักษณะของแบกที่เรียประจำถิ่นในดินที่มี การปนเปื้อนน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนด์ที่ใช้แล้วทั้งแบกที่เรียในดินโดยตรงและแบกที่เรียในดินระหว่างการ ส่งเสริมการเจริญ โดยการทำ Enrichment cultre Wบว่าดิน C มีความหลากหลายและมีความอุดมสมบูรณ์ ของแบกที่รียมากที่สุด เนื่องจากดิน C มีความเข้มข้นของน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วที่ดีกว่าและมี องค์ประกอบของน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วที่ใหม่กว่าเมื่อเปรียบเทียบกับดิน A หรือ B ที่มีความ ซับซ้อนของน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วมากกว่า หลังจากการทำการส่งเสริมการเจริญของแบกที่เรียในดินที่ปนเปื้อนน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้ แล้วด้วยเทคนิค Enrichment culture สามารถดเลือกแบกที่รียที่มีความสามารถในการใช้น้ำมันหล่อลื่น เครื่องขนต์ที่ใช้แล้วเป็นแหล่งการ์บอนได้ทั้งหมด 45 สายพันธุ์ นำแบคทีเรียที่แยกได้ทุกสายพันธุ์มาคัดเลือกสายพันธุ์ที่มีความสามารถในการเจริญและสามารถย่อยสลาย -hexadecane ในอาหาร MSM เป็น เวลา 3 วัน โดยพบว่าสาชพันธุ์ XM32 มีความสามารถในการช่อยสลาย *-hexadecane สูงที่สุดได้เท่ากับ 18.90 เปอร์เซ็นต์ เมื่อนำไปเทียบเยงสายพันธุ์ด้วยวิธีเทียบลำดับ นิวกลี โอไทด์ของยืน16s DNA พบว่า สายพันธุ์ NM32 มีความใกล้เคียง กับ Leucobacter chromireducens 99 เปอร์เซ็นต์ จึงให้ชื่อว่า L. chromireducens NM32 นำแบคที่เรียสายพันธุ์ .. chromireducens NM32 มาประยุกค์ใช้ในการส่งเสริม การย่อยสลาขน้ำมันหล่อลื่นเครื่องขนต์ที่ใช้แล้วที่ปนเปื้อนในชุดดินทคลอง การเติม I. chromireducens NM32 และ ปู้ยอนินทรีย์ใน ชุดการทดลอง SNL ช่วยส่งเสริมการทำงานของแบที่เรียประจำถิ่น ในดินใบ ระหว่างการย่อยสลายน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้ว โดยให้ผลการย่อยสลายน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนด์ ที่ใช้แล้วสูงสุด 5604 เปอร์เซ็นต์และมีการเพิ่มจำนวนของแบกที่เรียสูงที่สุด 6.10 Ig CFU ต่อกรัมดิน ภายใน 60 วันของการทคลอง นอกจากนี้ชุดการทคลอง SNL ขังให้ผลอัตราการย่อยสลายน้ำมันหล่อลื่น เครื่องยนต์ที่ใช้แล้วที่ดีที่สุด 0.0137 ต่อวัน ซึ่งมีค่ครึ่งชีวิตอยู่ 50.61 วัน จากการศึกษาการส่งเสริมการย่อย สลาขน้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แส้วในครั้งนี้สรุปได้ว่าต้องใช้เวล1 34 เดือนในการย่อยสลาย น้ำมันหล่อลื่นเครื่องยนต์ที่ใช้แล้วให้สมบูรณ์ โดยการทำงานร่วมกันระหว่าง L. chromireducens NM32 แบกที่เรียประจำถิ่นและปุ๊ยอนินทรีย์

คำสำคัญ