การขยายพันธุ์ผ่านกระบวนการโซมาติกเอ็มบริโอเจเนซีสและการถ่ายยีน mangrinเข้าสู่ปาล์มน้ำมันพันธุ์ทรัพย์ ม.อ. โดยใช้ Agrobacterium tumefaciens

บทคัดย่อ

ปาล์มน้ำมันเป็นพืชน้ำมันที่สำคัญเนื่องจากให้ปริมาณน้ำมันต่อพื้นที่สูง ปาล์มน้ำมันมีจุดเจริญปลายยอดเพียงจุดเดียว ดังนั้นการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อผ่านกระบวนการสร้างโซมาติกเอ็มบริโอช่วยขยายพันธุ์ได้ จากปัญหาดินเค็มส่งผลกระทบต่อการเจริญเติบโตและผลผลิตของปาล์มน้ำมัน ดังนั้นการปรับปรุงพันธุ์ปาล์มน้ำมันให้ทนต่อความเค็มจึงมีความสำคัญ การถ่ายยีนเป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพใช้เวลาน้อยกว่าการปรับปรุงพันธุ์แบบดั้งเดิม ดังนั้นงานวิจัยนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อการพัฒนาเป็นพืชต้นใหม่ผ่านกระบวนการสร้างโซมาติกเอ็มบริโอ และการถ่ายยีน mangrin เข้าสู่ปาล์มน้ำมันพันธุ์ลูกผสมพันธุ์ทรัพย์ ม.อ. 1 (‘25C3/77’) เอ็มบริโอเจนิคแคลลัส (embryogenic callus: EC) ให้อัตราการสร้างโซมาติกเอ็มบริโอระยะสร้างจาว (haustorium embryo; HE) สูงสุด 78.11 เปอร์เซ็นต์ และจำนวน HE สูงสุด 3.67 เอ็มบริโอต่อหลอด บนอาหารแข็งสูตรเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อปาล์มน้ำมัน (oil palm culture medium: OPCM) เติม N6-(2-isopentenyl) adenine (2-iP) เข้มข้น 0.3 มิลลิกรัมต่อลิตร HEs ขนาดใหญ่กว่า 6 มิลลิเมตร ให้อัตราการสร้างโซมาติกเอ็มบริโอชุดที่สอง (secondary somatic embryo; SSE) สูงสุด 81.39 เปอร์เซ็นต์ และจำนวน SSE 15.10 เอ็มบริโอต่อ HE ที่ตอบสนองสูงที่สุด บนอาหารแข็งสูตร MS เติมซอร์บิทอล เข้มข้น 0.2 โมลาร์ หลังจากวางเลี้ยงเป็นเวลา 8 สัปดาห์ EC อายุ 5 สัปดาห์ เลี้ยงร่วมกับ Agrobacterium tumefaciens สายเชื้อ LBA4404 (pGWB602) ที่มียีน mangrin เป็นเวลา 4 ชั่วโมง ในสภาพมืด 3 วัน และวางเลี้ยงบนอาหารกำจัดเชื้อนาน 2 สัปดาห์ ให้อัตราการรอดชีวิต 100 เปอร์เซ็นต์ เมื่อย้ายไปเลี้ยงบนอาหารที่เติม Basta? ความเข้มข้น 5 มิลลิกรัมต่อลิตร นาน 4 สัปดาห์ รอดชีวิตสูงสุด 90 เปอร์เซ็นต์ พืชต้นใหม่จาก EC มีแถบดีเอ็นเอของยีน mangrin EC ที่ผ่านการถ่ายยีน ให้น้ำหนักสดแคลลัส และปริมาณโพรลีนสูงกว่าชุดควบคุม (ไม่ถ่ายยีน) เมื่อเพาะเลี้ยงในอาหารที่เติมโซเดียมคลอไรด์ความเข้มข้น 300 มิลลิโมลาร์ สรุปได้ว่าการถ่ายยีน mangrin เข้าสู่ชิ้นส่วน EC ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการทนเค็มของปาล์มน้ำมันพันธุ์ทรัพย์ ม.อ. 1 (‘25C3/77’) ได้

คำสำคัญ