การบ่งชี้และศึกษาการทำงานของจิบเบอริลินเบตากลูโคไซเดสจากข้าว
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
จิบเบอริลิน (gibberellins, GA) เป็นฮอร์โมนพืชที่มีบทบาทหลายอย่างในการเจริญเติบโตของพืช เช่น การเจริญเติบโตของต้นอ่อน การงอกของเมล็ด การสร้างเมล็ด และอื่นๆ ในพืชฮอร์โมนจิบเบอริลิน จะถูกจับกับน้ำตาล และไม่ใช่น้ำตาลซึ่งจะทำให้ฮอร์โมนจิบเบอริลิน ไม่สามารถทำงานได้ ซึ่งคิดว่าเอนไซม์กลุ่มเอ็นไซม์กลูโคซิลทรานส์เฟอเรส (glycosyltransferases) ทำหน้าที่เติมกลูโคสทำให้จิบเบอริลินอยู่ในรูปกลูโคไซด์ (glucosides) และ ต่อกับน้ำตาลด้วยพันธะเอสเทอร์ (glucose esters) ได้มีการทดสอบพบว่าเอนไซม์ เบตา-กลูโคซิเดส (?-glucosidase) ทำหน้าที่ตัดกลูโคสออกจากจิบเบอริลินเพื่อให้จิบเบอริลินอยู่ในรูปทำงานได้ ในการศึกษานี้ เราหาวิธีที่จะแยกและศึกษา gibberellin ?-glucosidase จากข้าว ขั้นตอนแรกเราได้สังเคราะห์ gibberellin A4 glucose ester (GA4-GE) เพื่อใช้ทดสอบกับเอนไซม์ เบตา-กลูโคซิเดส ที่ผลิตจากแบคทีเรีย และ ที่ได้จากต้นอ่อนข้าว ซึ่งได้ทำให้บริสุทธิ์ด้วยวิธีคอลัมน์โครมาโตกราฟี แล้วเลือกเฉพาะตัวอย่างมีเอนไซม์ หลังจากตกตะกอนโปรตีนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตแล้วผ่านการแยก ให้บริสุทธิ์ อีก 6 ขั้นตอนพบว่ามีโปรตีน 2 ขนาด จากตัวอย่างที่สามารถย่อย GA4-GE และ ได้ 0.18% ของกิจกรรมของเอนไซม์จากเดิมและความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 337 เท่า ของเอนไซม์หลังจากตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต โปรตีนทั้ง 2 ขนาดถูกยืนยันโดยการย่อยโปรตีนที่ได้ โดยการย่อยของเอนไซม์ทริปซิน เปปไทด์ที่ได้ทำการเคราะห์ด้วยเครื่อง mass spectrometer โดยหนึ่งในสอง ของโปรตีนนั้นพบเอนไซม์ไกลโคไซม์ ไฮโดรเลส ตระกูล family1 (glycoside hydrolase family 1 protein (GH1)) คือ Os4BGlu13 ที่สามารถย่อย GA4-GE ได้ หรือมีชื่ออีกอย่างว่า tuberonic acid ?-glucosidase. ในการตรวจหาเอนไซม์ที่สามารถย่อย GA4-GE นั้นพบว่า Os3BGlu6 มีความจำเพาะต่อเอนไซม์สูง Os3BGlu6 ที่ถูกทำให้กลายพันธุ์ที่ตำแหน่งกรด-เบส และ นิวคลีโอไฟล์พบว่ามีความจำเพาะต่อ GA4-GE ลดลง ซึ่งเป็นไปตามความคาดหมาย และนอกจากนั้นความจำเพาะต่อ p-nitrophenylglucoside (pNPGlc) และซับสเตรทอีกสองชนิดก็ให้ผลคล้ายกันเพื่อ glucosyl azides จากผลการทดลองพบว่าเอนไซม์สามารถตัด glucosyl ester โดยใช้กลไกและความต้องการคล้ายกัน จากการศึกษาทำให้เราเข้าใจ การทำงาน ของ gibberellin gluco-conjugates ในข้าว รวมไปถึงการตัดของ glucose-1-esters.