การคัดแยกจุลินทรีย์ผลิตโปรติเอส เพื่อใช้สำหรับเร่งปฏิกิริยาการสังเคราะห์ น้ำตาลเอสเทอร์ในตัวทำละลายอินทรีย์

บทคัดย่อ

การคัดเลือกจุลินทรีย์ผลิตโปรติเอสที่มีความเสถียรในตัวทําละลายอินทรีย์จากตัวอย่างดินสามารถคัดแยก จุลินทรีย์ได้ 8 สายพันธุ์โดย Pseudomonas aeruginosa สายพันธุ์ SU2 เป็นจุลินทรีย์ผลิตโปรติเอสซึ่งมีความ เสถียรในตัวทําละลายอินทรีย์ที่ทดสอบมากที่สุด ผลการแยกบริสุทธิ์โปรติเอสที่ผลิตจากจุลินทรีย์สายพันธุ์ดังกล่าว พบว่าสามารถแยกโปรติเอสให้มีค่าความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 58.4 เท่า และมีผลได้ของกระบวนการแยกเท่ากับ 33.2% ขนาดโมเลกุลของโปรตีนเท่ากับ 33.86 kDa และมีค่า pI เท่ากับ 6.25 สภาวะที่เหมาะสมสําหรับการเร่งปฏิกิริยา ของโปรติเอสที่ผ่านกระบวนการแยกบริสุทธิ์คือที่ pH 8.0 อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส เอนไซม?มีความคงตัวในช่วง pH 6-8 อุณหภูมิต่ํากว่า 20 องศาเซลเซียส ไออนของ Ba 2+ , Ca 2+ , Mg 2+ ให้ผลกระตุ้นการเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ ขณะที่ Co 2+ , Cu 2+ และ Zn 2+ ยับยั้งเอนไซม์โปรติเอสจากจุลินทรีย์สายพันธุ์นี้อยู่ในกลุ่มของ metalloprotease เนื่องจากถูกยับยั้งด้วย EDTA และ 1,10 phenanthroline โปรติเอสบริสุทธิ์ที่แยกได้มีความคงตัวในสารลดแรง ตึงผิว (30% v/v triton X, 50% v/v Tween 20, 50% v/v Tween 80) สารออกซิไดซ์(30% v/v H2O2 ) และ ในตัวทําละลายอินทรีย์(75% v/v toluene) โดยมีค่าครึ่งชีวิต (half-life) เท่ากับ 30 ชั่วโมง ผลการสังเคราะห์ trehalose ester ด้วยโปรติเอสสกัดหยาบจาก Pseudomonas aeruginosa สายพันธุ์SU2 ใน DMF:DMSO (1:1 v/v) พบว่าเกิดผลิตภัณฑ์ที่มีretention time เท?ากับ 6.24 นาทีเมื่อวิเคราะห์ด้วย HPLC

คำสำคัญ