ชุดตรวจสอบอย่างง่ายในการตรวจเชื้อไวรัสโรคหลอดลมอักเสบติดต่อในไก่ด้วยดีเอ็นเอเซนเซอร์แบบแถบ

บทคัดย่อ

การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Infectious bronchitis virus (IBV) โดย ใช้ DNA Dipstick biosensor เพื่อลดขั้นตอนการตรวจวิเคราะห์เพื่อให้ทราบผลอย่างทันที และสามารถ ตรวจสอบการติดเชื้อที่มีปริมาณน้อยได้ สามารถน าไปใช้ประโยชน์ในด้านการตรวจวิเคราะห์นอกสถานที่ได้ดี ท าให้วิธีการ DNA Dipstick biosensor เหมาะสมที่จะน าไปใช้ในการเฝ้าระวังการปนเปื้อนเชื้อ IBV ในไก่ ผลการวิจัยพบว่า จากการสกัด RNA และ เปลี่ยนเป็น cDNA จากนั้นเพิ่มขยายดีเอ็นดีด้วยเทคนิค PCR/LAMP ในการตรวจหาเชื้อ เป็นเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง 30 นาที จากนั้นจะได้ DNA ผลผลิตเป็นจ านวนมาก โดยใน การท าปฏิกิริยา ด้วยวิธี Dipstick DNA biosensor ในการทดสอบผลผลิต PCR/LAMP ด้วย dipstick test พบว่า สามารถแสดงผลให้เห็นจากการปรากฎของ test line ได้ในปริมาณ DNA ตั้งแต่ 30 ?g/?l ถึง 3 pg/?l และในการทดสอบความจ าเพาะ โดยทดสอบกับ DNA จากเชื้อชนิดต่างๆ พบว่าการทดสอบไม่ปรากฎ test line พบว่าทั้ง Dipstick DNA biosensor สามารถตรวจพบเชื้อ IBV ในไก่ ภายในเวลา 2 ชั่วโมง สามารถ ตรวจสอบได้ในปริมาณ DNA เริ่มต้นที่น้อยที่สุด คือ 3 pg/?l และ ไม่พบการเกิด cross hybridization กับ เชื้อชนิดอื่นที่น ามาทดสอบ จึงท าให้พบว่าเทคนิคนี้มีความไว และความจ าเพาะสูง และสามารถตรวจสอบการ ติดเชื้อที่มีปริมาณน้อยได้ สามารถน าไปใช้ประโยชน์ในด้านการตรวจวิเคราะห์นอกสถานที่ได้ดี ท าให้วิธีการ DNA Dipstick biosensor เหมาะสมที่จะน าไปใช้ในการเฝ้าระวังการปนเปื้อนเชื้อ IBV ในไก่ได

คำสำคัญ