การทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพของรีคอมบิแนนท์โปรทีนสำหรับ Bone Morphogenetic Protein-2 ของมนุษย์ในเซลล์เพาะเลี้ยง human fetal osteoblast
ชื่อผู้แต่งข้างต้นเป็นข้อความจากระเบียนผลงาน ไม่ได้ผูกกับรหัสนักวิจัย จึงกดดูผลงานอื่นของบุคคลนี้ไม่ได้ — ในคลังนี้ 142,080 ผลงาน (63.6% ของทั้งหมด) มีชื่อผู้แต่งที่เชื่อมกับหน้าผู้แต่งได้ และ 60,298 ผลงาน (27.0%) มีผู้แต่งที่ผูกกับรหัสนักวิจัยจริง ส่วนอีก 81,382 ผลงานไม่มีข้อมูลผู้แต่งเลย (มีชื่อผู้แต่งเป็นข้อความอยู่ 142,009 ผลงาน = 63.5%)
บทคัดย่อ
Bone morphogenetic proteins ชนิดที่ 2 (BMP-2) ของมนุษย์เป็นโปรตีนที่มีบทบาทส าคัญอย่าง มากในกระบวนการกระตุ้นการเจริญเติบโต และการเจริญพัฒนาของเซลล์กระดูก รวมทั้งกระบวนการสร้าง กระดูกขึ้นมาทดแทนใหม่ งานวิจัยนี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อศึกษาฤทธิ์ทางชีวภาพของรีคอมพ์บิแนนท์โปรตีน BMP2 ของมนุษย์ โดยศึกษาฤทธิ์การกระตุ้นการแบ่งตัวเพิ่มจ านวน การเจริญพัฒนาและการแสดงออกของยีนบ่งชี้ การสร้างกระดูก ผู้วิจัยประสบความส าเร็จในการแสดงออกของรีคอมพ์บิแนนท์โปรตีน BMP-2 ของมนุษย์ใน รูปแบบโปรตีนที่สามารถละลายน้ า (soluble protein) ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ lacUV5 และ โปรตีนเอ หลังการเหนี่ยวน าด้วย IPTG โดยอาศัยระบบการแสดงออกในเซลล์เจ้าบ้านแบคทีเรีย E. coli รี คอมพ์บิแนนท์โปรตีน BMP-2 ของมนุษย์ถูกผลิตขึ้นมาในรูปแบบของโปรตีนเชื่อมต่อกับ ZZ domain และ กรดอะมิโนฮีสติดีนจ านวน 6 ตัวในบริเวณปลาย N ถูกแยกบริสุทธิ์โดยใช้เทคนิค affinity chromatography ชนิด IgG Sepharose 6 fast flow การวิเคราะห์โปรตีนด้วยเทคนิค SDS-PAGE, western blot และ LCMS/MS ยืนยันว่าโปรตีนบริสุทธิ์ที่ได้คือ รีคอมพ์บิแนนท์โปรตีน BMP-2 ของมนุษย์ผลการทดสอบฤทธิ์ทาง ชีวภาพในเซลล์เพาะเลี้ยงชนิด human fetal osteoblast cell line (hFOB 1.19) พบว่า rhBMP-2 สามารถ กระตุ้นการแบ่งตัวเพิ่มจ านวนของเซลล์ได้ตามความเข้มข้นของโปรตีนบริสุทธิ์ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยส าคัญทาง สถิติ การติดตามระดับการแสดงออกของเอนไซม์ Alkaline phosphatase (ALP) โดยเทคนิคการย้อมสีและ ติดตามระดับกิจกรรมการท างานของเอนไซม์ ALP พบว่ามีระดับมีระดับเพิ่มสูงขึ้นหลังการเติม rhBMP-2 การ ติดตามการแสดงออกของยีนบ่งชี้การสร้างกระดูกด้วยเทคนิค real-time quantitative RT-PCR (qRT-PCR) พบว่า rhBMP-2 สามารถเพิ่มการแสดงออกของยีน Alkaline phosphatase (ALP), Collagen type I (COL1), Bone morphogenetic protein-2 (BMP-2), Runt-related transcription factor 2 (Runx2) และ Osteopontin (OPN) ได้ นอกจากนั้น rhBMP-2 บริสุทธิ์มีประสิทธิภาพในการเพิ่มการสะสมแคลเซียม ซึ่งติดตามด้วยเทคนิคการย้อมสี Alizarin Red S จากข้อมูลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า รีคอมพ์บิแนนท์โปรตีน BMP-2 ของมนุษย์ที่ผลิตขึ้นมีฤทธิ์ทางชีวภาพในการกระตุ้นการแบ่งตัวเพิ่มจ านวนและกระบวนการเจริญ พัฒนาของเซลล์สร้างกระดูกของมนุษย์